Trichuris muris זיהום: מודל של חסינות סוג 2, דלקת במעיים

Published: May 24th, 2011

DOI:

10.3791/2774

Frann Antignano^1*, Sarah C. Mullaly^1*, Kyle Burrows¹, Colby Zaph^1,2

¹The Biomedical Research Centre, University of British Columbia, ²Department of Pathology and Laboratory Medicine, University of British Columbia

* These authors contributed equally

זיהום Trichuris muris הוא מודל מעיים של חסינות Th2 שבו עכברים עמיד ליצור תגובת Th2 מגן עכברים רגישים ליצור תגובה פתולוגית Th1.

Trichuris muris הוא פתוגן טבעי של עכברים דומה ביולוגית antigenically למינים של Trichuris כי להדביק בני אדם ובעלי חיים ^1. ביצי התולעת ניתנים על ידי gavage אוראלי, בוקעות במעי הדק הדיסטלי, לפלוש לתאי האפיתל במעי (IECs) כי קו מאורות של cecum ואת המעי הגס הפרוקסימלי ועל התבגרות תולעים שחרור ביצים לתוך הסביבה ^1. מודל זה הוא כלי רב עוצמה לבחון את הגורמים CD4 ⁺ T שליטה עוזר (ה ') בתא ההפעלה, כמו גם שינויים באפיתל המעי. התגובה החיסונית המתרחשת זנים טהורים עמידים, כגון C57BL / 6 BALB / c, מאופיין ציטוקינים Th2 מקוטב (IL-4, IL-5 ו-IL-13) וגירוש של תולעים בזמן Th1 הקשורים ציטוקינים (IL -12, IL-18, IFN-γ) לקדם דלקות כרוניות AKR רגישים מבחינה גנטית / עכברים J ^2-6. ציטוקינים Th2 לקדם שינויים פיזיולוגיים אצל microenvironment המעי כולל תחלופה מהירה של IECs, התמיינות תאים הגביע, גיוס ושינויים בחדירות אפיתל והתכווצות שרירים חלקים, אשר כולם היו מעורבים בגירוש תולעת ^7-15. כאן אנו פרט פרוטוקול עבור הפצת Trichuris ביצים muris אשר ניתן להשתמש בהם בניסויים הבאים. כמו כן אנו מספקים מדגם ניסיוני הקציר עם הצעות ניתוח שלאחר זיהום. בסך הכל, פרוטוקול זה יספק לחוקרים את הכלים הבסיסיים לביצוע muris זיהום Trichuris העכבר מודל אשר יכול לשמש כדי לענות על שאלות הנוגעות נטייה Th במערכת העיכול, כמו גם פונקציות מפעיל החיסונית של IECs.

1. הפצת Trichuris ביצים muris

כדי ליצור קבוצות חדשות של ביצים Trichuris muris, להדביק 20-30 עכברים immunodeficient (למשל NOD.Cg-Prkdc ^SCID Il2rg ^tm1Wjl / SzJ (NSG) או 129S6/SvEvTac-Rag2 ^tm1Fwa (RAG2 ^{- / -))} או עכברים רגישים מבחינה גנטית.......

פרוטוקול זה פרטים מנה ברמה גבוהה חריפה Trichuris muris זיהום אשר יכול להיות שונה כפי שנדרש על ידי החוקר. למשל, בעכברים אפשר להקריב ורקמות שנקטפו בימים שונים. כדי לקבוע כי העכברים הקימו בהצלחה נטל תולעת מלא הם יכולים להקריב ביום 14, ובשלב זה כל העכברים צריכים לשאת בנטל של ?.......

עבודה זו נתמכה על ידי המכון הקנדי לבריאות מחקר (MSH-95368, 89773 ו MOP-MOP-106,623 עד CZ) וקרן קנדה עבור חדשנות. SCM הוא הנמען של האגודה CIHR / הקנדי של אחווה לגסטרואנטרולוגיה דוקטורט. CZ הוא חוקר חדש CIHR.

....

שם מגיב	חברה	מספר קטלוגי	תגובות
Name	Company	Catalog Number	Comments
האכלת בעלי חיים מחטים (18 x ½ 1 ")	פופר	7912
מלקחיים מעוקל חלקות	Roboz	RS-5047
DMEM	Gibco	11965
NOD.Cg-Prkdc ^SCID Il2r ^gtm1Wjl / SzJ (NSG)	ג'קסון מעבדות	005557	אלה הם העכברים השתמשנו, לעומת זאת, כל העכברים immunodeficient או זן רגיש צריך לעבוד.
RNAlater	Qiagen	76104
2 מ"ל צינורות	Axygen	MCT-200-C
15 צינורות מ"ל	בז	352096
6 צלחות טוב	בז	353046
Paraformaldehyde	מיקרוסקופית אלקטרונים המדע	15710
α-RELMβ נוגדן	PeproTech Inc	0694270Rb

Cliffe, L. J., Grencis, R. K. The Trichuris muris system: a paradigm of resistance and susceptibility to intestinal nematode infection. Adv. Parasitol. 57, 255-307 (2004).
Else, K. J., Finkelman, F. D., Maliszewski, C. R., Grencis, R. K. Cytokine-mediated regulation of chronic intestinal helminth infection. J. Exp. Med. 179, 347-351 (1994).
Bancroft, A. J., Grencis, R. K. Th1 and Th2 cells and immunity to intestinal helminths. Chem. Immunol. 71, 192-208 (1998).
Bancroft, A. J., McKenzie, A. N., Grencis, R. K. A critical role for IL-13 in resistance to intestinal nematode infection. J. Immunol. 160, 3453-3461 (1998).
Helmby, H., Takeda, K., Akira, S., Grencis, R. K. Interleukin (IL)-18 promotes the development of chronic gastrointestinal helminth infection by downregulating IL-13. J. Exp. Med. 194, 355-364 (2001).
Owyang, A. M. Interleukin 25 regulates type 2 cytokine-dependent immunity and limits chronic inflammation in the gastrointestinal tract. J. Exp. Med. 203, 843-849 (2006).
Artis, D. RELMβ/FIZZ2 is a goblet cell-specific immune-effector molecule in the gastrointestinal tract. Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A. 101, 13596-13600 (2004).
Datta, R. Identification of novel genes in intestinal tissue that are regulated after infection with an intestinal nematode parasite. Infect. Immun. 73, 4025-4033 (2005).
Cliffe, L. J. Accelerated intestinal epithelial cell turnover: a new mechanism of parasite expulsion. Science. 308, 1463-1465 (2005).
Artis, D. New weapons in the war on worms: identification of putative mechanisms of immune-mediated expulsion of gastrointestinal nematodes. Int. J. Parasitol. 36, 723-733 (2006).
Finkelman, F. D. Cytokine regulation of host defense against parasitic gastrointestinal nematodes: lessons from studies with rodent models. Annu. Rev. Immunol. 15, 505-533 (1997).
Grencis, R. K. Enteric helminth infection: immunopathology and resistance during intestinal nematode infection. Chem. Immunol. 66, 41-61 (1997).
Khan, W. I. Modulation of intestinal muscle contraction by interleukin-9 (IL-9) or IL-9 neutralization: correlation with worm expulsion in murine nematode infections. Infect. Immun. 71, 2430-2438 (2003).
Khan, W. I., Blennerhasset, P., Ma, C., Matthaei, K. I., Collins, S. M. Stat6 dependent goblet cell hyperplasia during intestinal nematode infection. Parasite Immunol. 23, 39-42 (2001).
Akiho, H., Blennerhassett, P., Deng, Y., Collins, S. M. Role of IL-4, IL-13, and STAT6 in inflammation-induced hypercontractility of murine smooth muscle cells. Am. J. Physiol. Gastrointest. Liver Physiol. 282, 226-2232 (2002).
Kopper, J. J., Mansfield, L. S. Development of improved methods for delivery of Trichuris muris to the laboratory mouse. Parasitol. Res. 107, 1103-1113 (2010).
Bancroft, A. J., Else, K. J., Grencis, R. K. Low-level infection with Trichuris muris significantly affects the polarization of the CD4 response. Eur. J. Immunol. 24, 3113-3118 (1994).