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Immunology and Infection

Trichuris Muris Infezione: un modello di tipo 2 Immunità e infiammazione nell'intestino

Published: May 24th, 2011

DOI:

10.3791/2774

1The Biomedical Research Centre, University of British Columbia, 2Department of Pathology and Laboratory Medicine, University of British Columbia
* These authors contributed equally

Trichuris infezione Muris è un modello di immunità intestinale Th2 dove topi resistenti generare una risposta protettiva Th2 e topi suscettibili generare una patologica risposta Th1.

Trichuris Muris è un patogeno naturale di topi ed è biologicamente e antigenicamente simili alle specie di Trichuris che infettano gli esseri umani e animali 1. Uova infette sono dati mediante sonda gastrica, schiudono nel piccolo intestino distale, invadono le cellule epiteliali intestinali (IXC) che la linea di cripte del cieco e del colon prossimale e alla maturazione dei worm rilasciare le uova nell'ambiente 1. Questo modello è uno strumento potente per esaminare i fattori che controllo CD4 + T helper (Th) l'attivazione delle cellule così come i cambiamenti a livello dell'epitelio intestinale. La risposta immunitaria che si verifica in ceppi inbred, come C57BL / 6 e BALB / c, è caratterizzato da citochine Th2 polarizzata (IL-4, IL-5 e IL-13) e l'espulsione di vermi, mentre associata citochine Th1 (IL -12, IL-18, IFN-γ) promuovere le infezioni croniche in AKR geneticamente suscettibili / topi J 2-6. Citochine Th2 promuovere cambiamenti fisiologici nel microambiente intestinale compreso rapido turnover di IXC, la differenziazione delle cellule caliciformi, di reclutamento e cambiamenti della permeabilità epiteliale e la contrazione della muscolatura liscia, che sono stati implicati in espulsione verme 7-15. Qui dettaglio un protocollo per la propagazione Trichuris uova Muris, che possono essere utilizzati in esperimenti successivi. Forniamo anche un raccolto sperimentale campione con suggerimenti per l'analisi post-infezione. Nel complesso, questo protocollo fornirà ai ricercatori gli strumenti di base per eseguire un mouse Trichuris Muris modello di infezione che può essere utilizzata per affrontare questioni relative alla propensione Th nel tratto gastrointestinale e immunitario funzioni effettrici delle IXC.

1. Moltiplicazione Trichuris uova Muris

  1. Per generare nuovi lotti di uova di Trichuris Muris, infettare 20-30 topi immunodeficienti (es. NOD.Cg-Prkdc scid Il2rg tm1Wjl / SzJ (NSG) o 129S6/SvEvTac-Rag2 tm1Fwa (RAG2 - / -)) o topi geneticamente suscettibili ( ad es. AKR / J), che sono 6-8 settimane di età con circa 300 uova di Trichuris Muris mediante sonda gastrica.
  2. Dopo 32-35 giorni sacrificare i topi da CO 2 .......

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Questo protocollo dettagli di un elevato standard dose acuta di infezione Trichuris Muris, che può essere modificato come richiesto dallo sperimentatore. Per esempio, i topi possono essere sacrificati e tessuti raccolti in giorni diversi. Per determinare che i topi hanno stabilito con successo pieno carico vermi possono essere sacrificati al giorno 14, momento in cui tutti i mouse dovrebbe portare un peso di circa 200 vermi. I topi possono anche essere infettati per 32 giorni in cui ogni verme rilevato avrà r.......

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Questo lavoro è stato sostenuto dal Canadian Institutes of Health Research (MSH-95368, 89773 e-MOP MOP-106623 a CZ) e la Fondazione canadese per l'innovazione. SCM è il destinatario di un CIHR / Canadian Association of Gastroenterology borsa post-dottorato. CZ è un investigatore CIHR Nuovo.

....

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NameCompanyCatalog NumberComments
Nome del reagente Azienda Numero di catalogo Commenti
Aghi di alimentazione animale (18 x 1 ½ ") Bottone automatico 7912
Liscio Pinza curva Roboz RS-5047
DMEM Gibco 11965
NOD.Cg-Prkdc scid IL2r gtm1Wjl / SzJ (NSG) Jackson Laboratories 005557 Questi sono i topi che abbiamo usato, comunque, ogni topi immunodeficienti o ceppo suscettibile dovrebbe funzionare.
RNAlater Qiagen 76104
2 ml tubi Axygen MCT-200-C
Provette da 15 ml Falco 352096
6 piatti ben Falco 353046
Paraformaldeide Microscopia Elettronica Scienza 15710
α-RELMβ anticorpi Peprotech Inc 0694270Rb

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