Trichuris muris 감염 : 굿에서 2 형 내성 및 염증의 모델

Published: May 24th, 2011

DOI:

10.3791/2774

Frann Antignano^1*, Sarah C. Mullaly^1*, Kyle Burrows¹, Colby Zaph^1,2

¹The Biomedical Research Centre, University of British Columbia, ²Department of Pathology and Laboratory Medicine, University of British Columbia

* These authors contributed equally

Trichuris muris 감염은 모성 쥐가 보호 Th2 반응을 생성하고 민감한 쥐가 병적인 Th1 반응을 생성하는 Th2 면역의 창자 모델입니다.

Trichuris muris은 생쥐의 자연 병원체이며 인간과 가축 ¹ 감염 Trichuris의 수종에 생물학과 antigenically 비슷합니다. Infective 달걀이 구두 gavage, 말초 소장에서 부화에 의해 부여됩니다, 라인 -이게 맹장과 근위 결장과 성숙시 crypts이 웜은 환경 ^1에 달걀을 풀어 그 창자 상피 세포 (IECs)를 침공. 이 모델은 요소를 검토하는 강력한 도구입니다 컨트롤 CD4 ⁺ T는 헬퍼 (TH) 세포 활성화뿐 아니라 창자 상피의 변화. 이러한 C57BL / 6 BALB / C와 같은 저항 근친 직전에 발생하는 면역 반응이 Th2 편광 크린 시토킨 (IL - 4, IL - 5, IL - 13)과 Th1 - 관련 크린 시토킨 동안 (IL 웜의 퇴학이 특징입니다 -12, IL - 18, IFN - γ) 유전자 취약 AKR / J 마우스 ^2-6에서 만성 감염을 추진하고 있습니다. Th2 크린 시토킨 신속 IECs의 매출, 고블렛 셀 차별화, 모집 및 상피 투과성 및 웜 퇴학 ^7-15에 연루되어 모든있는 평활근의 수축에 변화를 포함한 창자 microenvironment의 생리 변화를 추진하고 있습니다. 여기 자세히 후속 실험에서 사용할 수 Trichuris muris 달걀을 전파를위한 프로토콜을. 우리는 또한 이후의 감염 분석을위한 제안 샘플 실험의 수확을 제공합니다. 전반적으로,이 프로토콜은 위장관뿐만 아니라 IECs의 면역 이펙터 기능에 목 proclivity에 관한 질문을 해결하기 위해 사용할 수있는 Trichuris muris 마우스 감염 모델을 수행할 수있는 기본 도구와 연구자를 제공할 것입니다.

1. Trichuris muris 달걀을 전파

(또는 유전자 취약 마우스 Trichuris muris 달걀의 새로운 배치를 생성하려면, 20-30 immunodeficient 생쥐를 감염 () 예 NOD.Cg - Prkdc ^scid Il2rg ^tm1Wjl / SzJ (NSG) 또는 129S6/SvEvTac-Rag2 ^tm1Fwa (RAG2 ^{- - /)} 예. 경구 gavage으로 약 300 Trichuris muris 달걀과 6~8주 된 AKR / J).
32-35일 후 CO ₂ 질식하여 쥐를 희생.
마우스의 ?.......

이 프로토콜은 자세한 조사가 필요에 따라 수정할 수있는 표준 고용량 급성 Trichuris muris 감염합니다. 예를 들어, 마우스가 희생될 수 있으며, 조직은 다른 일 수확. 생쥐가 성공적으로 가득 벌레 부담을 설립한다는 결정하기 위해 그들은 모두 쥐가 약 200 벌레의 부담을 가지고해야하는 시점에서, 하루 14 희생하실 수 있습니다. 생쥐도 감지하는 웜이 성숙에 도달하고 그 삶의 기간 동안 호스?.......

이 작품은 건강 연구의 캐나다 연구소 (MSH - 95368, 청소 - 89,773 및 CZ하는 걸레 - 106623)과 혁신에 대한 캐나다 재단에 의해 지원되었다. SCM은 위장 박사 교제의 CIHR / 캐나다 협회의받는 사람입니다. CZ는 CIHR 새로운 탐정이다.

....

시약의 이름	회사	카탈로그 번호	댓글
Name	Company	Catalog Number	Comments
동물 먹이 니들스 (18 × 1 ½ ")	포퍼	7912
부드러운 곡선 집게	Roboz	RS - 5047
DMEM	Gibco	11,965
NOD.Cg - Prkdc ^scid Il2r ^gtm1Wjl / SzJ (NSG)	잭슨 연구소	005557	이들은 우리가 사용 생쥐되며, 단, immunodeficient 마우스 또는 민감한 긴장이 작동합니다.
RNAlater	Qiagen	76,104
2 ML 튜브	Axygen	MCT - 200 - C
15 ML 튜브	매	352096
6 웰 플레이트	매	353046
Paraformaldehyde	전자 현미경 과학	15,710
α - RELMβ 항체	PeproTech 부동산	0694270Rb

Cliffe, L. J., Grencis, R. K. The Trichuris muris system: a paradigm of resistance and susceptibility to intestinal nematode infection. Adv. Parasitol. 57, 255-307 (2004).
Else, K. J., Finkelman, F. D., Maliszewski, C. R., Grencis, R. K. Cytokine-mediated regulation of chronic intestinal helminth infection. J. Exp. Med. 179, 347-351 (1994).
Bancroft, A. J., Grencis, R. K. Th1 and Th2 cells and immunity to intestinal helminths. Chem. Immunol. 71, 192-208 (1998).
Bancroft, A. J., McKenzie, A. N., Grencis, R. K. A critical role for IL-13 in resistance to intestinal nematode infection. J. Immunol. 160, 3453-3461 (1998).
Helmby, H., Takeda, K., Akira, S., Grencis, R. K. Interleukin (IL)-18 promotes the development of chronic gastrointestinal helminth infection by downregulating IL-13. J. Exp. Med. 194, 355-364 (2001).
Owyang, A. M. Interleukin 25 regulates type 2 cytokine-dependent immunity and limits chronic inflammation in the gastrointestinal tract. J. Exp. Med. 203, 843-849 (2006).
Artis, D. RELMβ/FIZZ2 is a goblet cell-specific immune-effector molecule in the gastrointestinal tract. Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A. 101, 13596-13600 (2004).
Datta, R. Identification of novel genes in intestinal tissue that are regulated after infection with an intestinal nematode parasite. Infect. Immun. 73, 4025-4033 (2005).
Cliffe, L. J. Accelerated intestinal epithelial cell turnover: a new mechanism of parasite expulsion. Science. 308, 1463-1465 (2005).
Artis, D. New weapons in the war on worms: identification of putative mechanisms of immune-mediated expulsion of gastrointestinal nematodes. Int. J. Parasitol. 36, 723-733 (2006).
Finkelman, F. D. Cytokine regulation of host defense against parasitic gastrointestinal nematodes: lessons from studies with rodent models. Annu. Rev. Immunol. 15, 505-533 (1997).
Grencis, R. K. Enteric helminth infection: immunopathology and resistance during intestinal nematode infection. Chem. Immunol. 66, 41-61 (1997).
Khan, W. I. Modulation of intestinal muscle contraction by interleukin-9 (IL-9) or IL-9 neutralization: correlation with worm expulsion in murine nematode infections. Infect. Immun. 71, 2430-2438 (2003).
Khan, W. I., Blennerhasset, P., Ma, C., Matthaei, K. I., Collins, S. M. Stat6 dependent goblet cell hyperplasia during intestinal nematode infection. Parasite Immunol. 23, 39-42 (2001).
Akiho, H., Blennerhassett, P., Deng, Y., Collins, S. M. Role of IL-4, IL-13, and STAT6 in inflammation-induced hypercontractility of murine smooth muscle cells. Am. J. Physiol. Gastrointest. Liver Physiol. 282, 226-2232 (2002).
Kopper, J. J., Mansfield, L. S. Development of improved methods for delivery of Trichuris muris to the laboratory mouse. Parasitol. Res. 107, 1103-1113 (2010).
Bancroft, A. J., Else, K. J., Grencis, R. K. Low-level infection with Trichuris muris significantly affects the polarization of the CD4 response. Eur. J. Immunol. 24, 3113-3118 (1994).