Trichuris Muris Infecção: Um Modelo de imunidade do tipo 2 e inflamação no intestino

Published: May 24th, 2011

DOI:

10.3791/2774

Frann Antignano^1*, Sarah C. Mullaly^1*, Kyle Burrows¹, Colby Zaph^1,2

¹The Biomedical Research Centre, University of British Columbia, ²Department of Pathology and Laboratory Medicine, University of British Columbia

* These authors contributed equally

Trichuris Muris infecção intestinal é um modelo de imunidade Th2 onde os ratos resistentes ao gerar uma resposta protetora Th2 e camundongos suscetíveis de gerar uma resposta Th1 patológico.

Trichuris Muris é um patógeno natural de ratos e é biologicamente e antigenicamente semelhante a espécies de Trichuris que infectam seres humanos e animais ^1. Ovos infectantes são dadas por gavagem oral, escotilha no intestino delgado distal, invadem as células epiteliais intestinais (CIEM) que revestem as criptas do ceco e cólon proximal e sobre a maturação dos vermes liberam os ovos no ambiente ^1. Este modelo é uma ferramenta poderosa para analisar os fatores que a ativação de células CD4 controle ⁺ T helper (Th), bem como alterações no epitélio intestinal. A resposta imune que ocorre em cepas resistentes puras, tais como C57BL / 6 e BALB / c, é caracterizada por citocinas Th2 polarizada (IL-4, IL-5 e IL-13) e expulsão de vermes enquanto Th1 associado citocinas (IL -12, IL-18, IFN-γ) promover infecções crônicas em AKR geneticamente suscetíveis / mice J ^2-6. Citocinas Th2 promover mudanças fisiológicas no microambiente intestinal incluindo rotatividade de IECs, a diferenciação de células caliciformes, recrutamento e alterações na permeabilidade epitelial e contração do músculo liso, as quais têm sido implicados na expulsão verme ^15/07. Aqui detalhamos um protocolo para a propagação de ovos de Trichuris Muris que pode ser usado em experimentos posteriores. Nós também fornecemos uma colheita de amostra experimental com sugestões para análise pós-infecção. Globalmente, este protocolo irá fornecer aos pesquisadores as ferramentas básicas para realizar uma Trichuris Muris modelo de infecção do mouse que podem ser utilizados para tratar questões relativas à propensão Th no trato gastrointestinal, bem como as funções efectoras imunes de IECs.

1. Propagação ovos de Trichuris Muris

Para gerar novos lotes de ovos de Trichuris Muris, 20-30 infectar camundongos imunodeficientes (ex. NOD.Cg-Prkdc ^scid Il2rg ^tm1Wjl / SzJ (NSG) ou 129S6/SvEvTac-Rag2 ^tm1Fwa (RAG2 ^{- / -))} ou camundongos geneticamente suscetíveis ( por exemplo. AKR / J), que são de 6-8 semanas de idade com cerca de 300 ovos de Trichuris Muris por gavagem oral.
Depois de 32-35 dias sacrifício dos camundongos.......

Este protocolo detalhes um alto padrão dose aguda Trichuris Muris infecção que pode ser modificado conforme exigido pelo investigador. Por exemplo, ratos podem ser sacrificados e os tecidos colhidas em dias diferentes. Para determinar que os ratos com sucesso estabelecida carga parasitária total que pode ser sacrificada no dia 14, altura em que todos os camundongos deve levar uma carga de aproximadamente 200 worms. Ratos também podem ser infectados por 32 dias, onde qualquer worm detectado terá atingido m.......

Este trabalho foi financiado pelos Institutos Canadenses de Pesquisa em Saúde (MSH-95368, 89773 e MOP-MOP-106623 para CZ) e da Fundação Canadense para a Inovação. SCM é o destinatário de uma Associação CIHR / canadense de Gastroenterologia pós-doutorado. CZ é um investigador CIHR Novo.

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Nome do reagente	Companhia	Número de catálogo	Comentários
Name	Company	Catalog Number	Comments
Animais Agulhas Alimentação (18 x 1 ½ ")	Popper	7912
Pinça curva suave	Roboz	RS-5047
DMEM	Gibco	11965
NOD.Cg-Prkdc ^scid Il2r ^gtm1Wjl / SzJ (NSG)	Jackson Laboratories	005557	Estes são os ratos que usamos, no entanto, qualquer camundongos imunodeficientes ou linhagem suscetível deve funcionar.
RNAlater	Qiagen	76104
2 tubos de ml	Axygen	MCT-200-C
Tubos de 15 ml	Falcão	352096
6 placas bem	Falcão	353046
Paraformaldeído	Electron Microscopy Ciência	15710
α-RELMβ anticorpos	PeproTech Inc	0694270Rb

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