Trichuris Muris Инфекция: Модель Тип 2 иммунитет и воспаление в кишечнике

Published: May 24th, 2011

DOI:

10.3791/2774

Frann Antignano^1*, Sarah C. Mullaly^1*, Kyle Burrows¹, Colby Zaph^1,2

¹The Biomedical Research Centre, University of British Columbia, ²Department of Pathology and Laboratory Medicine, University of British Columbia

* These authors contributed equally

Trichuris Muris инфекция кишечная модель Th2 иммунитет, где устойчивы мыши генерировать защитный Th2 ответа и восприимчивы мыши генерировать патологических Th1 ответа.

Trichuris Muris является естественным возбудителем мышей и биологически и антигенно похожи на виды Trichuris, поражающих человека и домашнего скота ^1. Инфекционный яйца даются устные желудочный зонд, люк в дистальных отделах тонкой кишки, проникают в эпителиальные клетки кишечной (IECS), что линия склепы слепой кишки и проксимальной толстой кишки и при созревании червей выпуск яиц в окружающую среду ^1. Эта модель представляет собой мощный инструмент для изучения факторов, которые контролируют CD4 ⁺ Т-хелперов (Th), активации клеток, а также изменения в кишечном эпителии. Иммунного ответа, что происходит в устойчивых инбредных линий, таких как C57BL / 6 и BALB / с, характеризуется Th2 поляризованных цитокинов (IL-4, IL-5 и ИЛ-13) и изгнание червей в то время как Th1-связанных цитокинов (IL -12, Ил-18, ИФН-γ) содействовать хронические инфекции у генетически предрасположенных AKR / J мышей ^2-6. Th2 цитокинов способствовать физиологические изменения в желудочно-кишечном микроокружения в том числе быстрый оборот IECS, дифференциация кубок клетки, найма и изменения в эпителиальной проницаемости и сокращение гладких мышц, которые были вовлечены в изгнание червя ^7-15. Здесь мы подробно протокол за распространение Trichuris Muris яиц, которые можно использовать в последующих экспериментах. Мы также предоставляем сбора образцов экспериментальной с предложениями по пост-инфекции анализа. В целом, этот протокол будет предоставить исследователям с основными инструментами для выполнения мыши Trichuris Muris инфекции модель, которая может быть использована для решения вопросов, связанных с Th склонности в желудочно-кишечном тракте, а также иммунные эффекторные функции IECS.

1. Распространение Trichuris Muris яйца

Для создания новых партий Trichuris яйца Muris, заразить 20-30 иммунодефицитных мышей (например, NOD.Cg-Prkdc ^SCID Il2rg ^tm1Wjl / SzJ (ГЯП) или 129S6/SvEvTac-Rag2 ^tm1Fwa (RAG2 ^{- / -))} или генетически предрасположенных мышей ( например. AKR / J), которые 6.......

Этот протокол детали стандартных высокие дозы острого Trichuris Muris инфекция, которая может быть изменена в соответствии с требованиями следователя. Например, мыши могут быть принесены в жертву и тканей собраны в разные дни. Установить, что мышей успешно создана всю тяжесть червя они м.......

Работа выполнена при поддержке Канадского института исследований в области здравоохранения (MSH-95368, СС-89 773 и СС-106 623 в ЧР) и Канаде Фонд инноваций. СКМ является получателем CIHR / Канадская ассоциация гастроэнтерологов докторской стипендии. CZ является CIHR Новый следователь.

....

Название реагента	Компания	Номер в каталоге	Комментарии
Name	Company	Catalog Number	Comments
Кормления животных иглы (18 х 1 ½ ")	Стрелок	7912
Гладкая изогнутые щипцы	Roboz	RS-5047
DMEM	Гибко	11965
NOD.Cg-Prkdc ^SCID Il2r ^gtm1Wjl / SzJ (ГЯП)	Джексон лаборатории	005557	Это мы использовали мышей, однако, любые иммунодефицитных мышей или восприимчивы напряжение должно работать.
RNAlater	Qiagen	76104
2 мл пробирок	Axygen	MCT-200-C
15 мл пробирок	Сокол	352096
6 луночных	Сокол	353046
Параформальдегид	Электронная микроскопия науки	15710
α-RELMβ антител	PeproTech Inc	0694270Rb

Cliffe, L. J., Grencis, R. K. The Trichuris muris system: a paradigm of resistance and susceptibility to intestinal nematode infection. Adv. Parasitol. 57, 255-307 (2004).
Else, K. J., Finkelman, F. D., Maliszewski, C. R., Grencis, R. K. Cytokine-mediated regulation of chronic intestinal helminth infection. J. Exp. Med. 179, 347-351 (1994).
Bancroft, A. J., Grencis, R. K. Th1 and Th2 cells and immunity to intestinal helminths. Chem. Immunol. 71, 192-208 (1998).
Bancroft, A. J., McKenzie, A. N., Grencis, R. K. A critical role for IL-13 in resistance to intestinal nematode infection. J. Immunol. 160, 3453-3461 (1998).
Helmby, H., Takeda, K., Akira, S., Grencis, R. K. Interleukin (IL)-18 promotes the development of chronic gastrointestinal helminth infection by downregulating IL-13. J. Exp. Med. 194, 355-364 (2001).
Owyang, A. M. Interleukin 25 regulates type 2 cytokine-dependent immunity and limits chronic inflammation in the gastrointestinal tract. J. Exp. Med. 203, 843-849 (2006).
Artis, D. RELMβ/FIZZ2 is a goblet cell-specific immune-effector molecule in the gastrointestinal tract. Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A. 101, 13596-13600 (2004).
Datta, R. Identification of novel genes in intestinal tissue that are regulated after infection with an intestinal nematode parasite. Infect. Immun. 73, 4025-4033 (2005).
Cliffe, L. J. Accelerated intestinal epithelial cell turnover: a new mechanism of parasite expulsion. Science. 308, 1463-1465 (2005).
Artis, D. New weapons in the war on worms: identification of putative mechanisms of immune-mediated expulsion of gastrointestinal nematodes. Int. J. Parasitol. 36, 723-733 (2006).
Finkelman, F. D. Cytokine regulation of host defense against parasitic gastrointestinal nematodes: lessons from studies with rodent models. Annu. Rev. Immunol. 15, 505-533 (1997).
Grencis, R. K. Enteric helminth infection: immunopathology and resistance during intestinal nematode infection. Chem. Immunol. 66, 41-61 (1997).
Khan, W. I. Modulation of intestinal muscle contraction by interleukin-9 (IL-9) or IL-9 neutralization: correlation with worm expulsion in murine nematode infections. Infect. Immun. 71, 2430-2438 (2003).
Khan, W. I., Blennerhasset, P., Ma, C., Matthaei, K. I., Collins, S. M. Stat6 dependent goblet cell hyperplasia during intestinal nematode infection. Parasite Immunol. 23, 39-42 (2001).
Akiho, H., Blennerhassett, P., Deng, Y., Collins, S. M. Role of IL-4, IL-13, and STAT6 in inflammation-induced hypercontractility of murine smooth muscle cells. Am. J. Physiol. Gastrointest. Liver Physiol. 282, 226-2232 (2002).
Kopper, J. J., Mansfield, L. S. Development of improved methods for delivery of Trichuris muris to the laboratory mouse. Parasitol. Res. 107, 1103-1113 (2010).
Bancroft, A. J., Else, K. J., Grencis, R. K. Low-level infection with Trichuris muris significantly affects the polarization of the CD4 response. Eur. J. Immunol. 24, 3113-3118 (1994).