Summary
Abstract
Protocol
Discussion
Acknowledgements
Materials
References
Immunology and Infection
Trichuris Muris infektion är en intestinal modell av Th2 immuniteten, om resistenta möss bildar ett skyddande Th2 respons och mottagliga möss generera en patologisk Th1 svar.
Trichuris Muris är en naturlig patogen av möss och är biologiskt och antigena liknande arter av Trichuris som infekterar människor och djur 1. Infektiösa ägg ges via oral sondmatning, lucka i distala tunntarmen, invadera tarmcellerna (IECS) som kantar kryptor i blindtarmen och proximala kolon och på mognad maskarna frigöra ägg i miljön 1. Denna modell är ett kraftfullt verktyg för att undersöka faktorer som styr CD4 + T-hjälparceller (Th) celler aktivering samt förändringar i intestinal epitel. Det immunsvar som sker i resistenta inavlade stammar, såsom C57BL / 6 och BALB / c, kännetecknas av Th2 polariserad cytokiner (IL-4, IL-5 och IL-13) och utvisning av maskar medan Th1-associerade cytokiner (IL -12, IL-18, IFN-γ) främja kroniska infektioner hos genetiskt känsliga AKR / möss J 2-6. Th2 cytokiner främja fysiologiska förändringar i intestinal mikromiljön bland annat snabb omsättning av IECS, bägare celldifferentiering, rekrytering och förändringar i epitelial permeabilitet och smidig muskel kontraktion, som alla har varit inblandade i masken utvisning 7-15. Här har vi närmare ett protokoll för att sprida Trichuris Muris ägg som kan användas i kommande experiment. Vi tillhandahåller också en skörd prov experimentell med förslag för post-infektion analys. Sammantaget kommer detta protokoll att ge forskare med grundläggande verktyg för att utföra en Trichuris Muris modell musen infektion som kan användas för att behandla frågor som rör Th benägenhet i mag-tarmkanalen samt immunsystemets effektorsteg av IECS.
1. Uppförökningsmaterial Trichuris Muris ägg
Detta protokoll detaljer en standard hög dos akut Trichuris Muris infektion som kan ändras efter behov av prövaren. Till exempel kan mössen offras och vävnader skördas på olika dagar. Att fastställa att de möss med framgång har etablerat fullt mask börda de kan offras på dag 14, då alla möss bör göra en börda på cirka 200 maskar. Möss kan också smittas i 32 dagar där någon mask upptäcks har nått mognad och skulle stanna hos värd under hela dess liv. Dessutom kan protokollet anpassas til.......
Detta arbete stöddes av den kanadensiska Institutes of Health Research (MSH-95.368, MOP-89.773 och MOP-106.623 till CZ) och Kanada Stiftelsen för innovation. SCM är mottagare av en CIHR / kanadensiska Association of Gastroenterology postdoktorsstipendium. CZ är ett CIHR ny utredare.
....Name | Company | Catalog Number | Comments |
Reagensets namn | Företag | Katalognummer | Kommentarer |
---|---|---|---|
Utfodring av djur Nålar (18 x 1 ½ ") | Popper | 7912 | |
Jämnt svängt Tång | Roboz | RS-5047 | |
DMEM | Gibco | 11.965 | |
NOD.Cg-Prkdc Scid Il2r gtm1Wjl / SzJ (NSG) | Jackson Laboratories | 005.557 | Dessa är de möss vi använde dock bör alla immunbrist möss eller känsliga stam arbete. |
RNAlater | Qiagen | 76.104 | |
2 ml rör | Axygen | MCT-200-C | |
15 ml rör | Falcon | 352.096 | |
6 brunnar | Falcon | 353.046 | |
Paraformaldehyd | Elektronmikroskopi Vetenskap | 15.710 | |
α-RELMβ antikropp | PeproTech Inc | 0694270Rb |
ABOUT JoVE
Copyright © 2024 MyJoVE Corporation. All rights reserved