Summary
Abstract
Protocol
Discussion
Acknowledgements
Materials
References
Immunology and Infection
Trichuris muris enfeksiyon dayanıklı farelerde koruyucu bir Th2 yanıtı oluşturmak ve duyarlı fareler patolojik bir Th1 yanıtı Th2 dokunulmazlık bağırsak modelidir.
Trichuris muris farelerin doğal bir patojen ve enfekte insanlar ve hayvancılık 1 Trichuris türleri biyolojik ve antijenik olarak benzer . Enfektif yumurta ağızdan sonda ile distal ince bağırsakta ambar tarafından verilen, çizgi çekum ve proksimal kolon ve olgunlaşma üzerine kript solucanlar ortamı içine 1 yumurta serbest intestinal epitel hücrelerinde (IECS) işgal. Bu model faktörleri incelemek için güçlü bir araç olduğunu kontrol CD4 + T helper (Th) hücre aktivasyonu yanı sıra bağırsak epitel değişiklikleri. C57BL / 6 ve BALB / c gibi dayanıklı kendilenmiş suşları, ortaya çıkan immün yanıt, polarize Th2 sitokinlerin (IL-4, IL-5 ve IL-13) ve ilişkili Th1 sitokinlerin iken (IL solucanlar sürülmesi ile karakterizedir -12, IL-18, IFN-γ) kronik enfeksiyonlar, genetik olarak yatkın AKR / J fareler 2-6 teşvik . Th2 sitokinleri hızlı IECS ciro, goblet hücre farklılaşması, işe alma ve epitelyal permeabilite ve düz kas kasılması, solucan sınırdışı 7-15 suçlanmıştır hangi değişiklikler dahil olmak üzere bağırsak mikroçevresinin fizyolojik değişiklikler teşvik eder. Burada detay Trichuris muris yumurta sonraki deneylerde kullanılan propaganda için bir protokol. Ayrıca enfeksiyon sonrası analizi için önerileri ile örnek bir deneysel hasat sağlar. Genel olarak, bu protokol, gastrointestinal sistem gibi IECS immün efektör fonksiyonları Th eğilimine ilişkin soruları yanıtlamak için kullanılabilecek bir Trichuris muris fare enfeksiyon modeli gerçekleştirmek için temel araçları araştırmacılar sağlayacaktır .
1. Trichuris muris yumurta Çoğaltım
Bu protokol, araştırmacı tarafından gerekli olarak modifiye edilebilir bir standart yüksek doz akut Trichuris muris enfeksiyon. Örneğin, fare kurban edilebilir ve dokuların farklı günlerde hasat. Farelerin tam solucan yükü başarıyla kurduk belirlemek için hangi noktada tüm fareler yaklaşık 200 solucanlar bir yük taşımak, 14. günde kurban edilebilir. Fareler de 32 gün için tespit edilen solucan olgunluğa erişmiş olacak ve ömrünün süresi için ev sahibi ile kalacaktı enfekte olabil.......
Bu çalışma, Kanada Sağlık Araştırma Enstitüsü (MSH-95.368, MOP-89.773 ve MOP-106.623 - CZ) ve Kanada Yenilik Vakfı tarafından desteklenmiştir. SCM, Gastroenteroloji doktora sonrası burs CIHR / Kanada Derneği alıcı. CZ CIHR Yeni Araştırmacı.
....Name | Company | Catalog Number | Comments |
Reaktifin Adı | Şirket | Katalog numarası | Yorumlar |
---|---|---|---|
Hayvan Besleme İğneler (18 x 1 ½ ") | Çıtçıt | 7912 | |
Pürüzsüz eğimli Forseps | Roboz | RS-5047 | |
DMEM | Gibco | 11965 | |
NOD.Cg Prkdc SCID Il2r gtm1Wjl / SzJ (NSG) | Jackson Laboratuvarları | 005557 | Bunlar kullanılan fareler, ancak, herhangi bir bağışık yetmezliği olan farelere veya zorlanma duyarlı çalışması gerektiğini. |
RNAlater | Qiagen | 76104 | |
2 ml tüpler | Axygen | MCT-200-C | |
15 ml tüpler | Şahin | 352096 | |
6 kuyucuğu | Şahin | 353046 | |
Paraformaldehit | Elektron Mikroskopi Bilimi | 15710 | |
α-RELMβ antikor | PeproTech Inc. | 0694270Rb |
ABOUT JoVE
Copyright © 2024 MyJoVE Corporation. All rights reserved