Tüm Influenza Kantitatif Analiz Basit Slot Blot Tahliller Evrensel Antikorlar kullanarak Viral Hemagglutinins ve nöraminidaz yazın

En korunmuş dizileri biyoinformatik analizleri ile tespit hedefleyen evrensel bir antikor kullanarak influenza virüs hemaglutinin ve nöraminidaz miktarının tayini için basit bir yuva blot yöntemi geliştirilmiştir. Bu yenilikçi yaklaşım, tüm viral hemaglutinin ve nöraminidaz kantitatif tayini için kullanışlı bir alternatif sunabilir.

Hemaglutinin (HA) ve nöraminidaz (NA), viral bir yaşam döngüsü ve koruyucu ^immün yanıtları 1,2 indüksiyonu önemli rol oynadığı bilinmektedir grip virüsleri iki yüzey proteinleri. HA nötralize edici antikorlar için ana hedef olarak, şu anda grip aşısı potens belirteci olarak kullanılır ve tek radyal immunodiffüzyon ^(SRID) 3 ile ölçülür . Ancak, ilgili alt tip spesifik antiserumlar durumu SRID bağımlılığı her yeni aşı serbest bırakılması için en az 2-3 ay gecikme neden olur. Ayrıca, NA da, koruyucu ^{bağışıklığı 4,} influenza aşılarının NA miktarını uygun reaktifler analitik ^yöntem 5 eksikliği nedeniyle henüz standart değil uyardığı kanıtlara rağmen . Böylece, HA ve NA antijenleri nicel kapasitesine sahip basit bir alternatif yöntemler hızlı serbest bırakılması ve influenza aşıları daha iyi kalite kontrol için arzu edilir.

Mevcut tüm influenza A HA ve NA dizileri Evrensel korunmuş bölgelerde ^6-7 biyoinformatik analizleri ile tespit edilmiştir. Bir dizisi (Uni-1 olarak belirlenen), iki korunmuş dizileri, enzimatik aktif sitesine yakın (HCA-2 olarak belirlenmiş) ve nöraminidaz tespit ise, füzyon ^peptid 6 HA, sadece evrensel korunmuş epitop tespit edildi N-terminalindeki diğer yakın (HCA-3 olarak belirlenmiş) ^7. Bu amino asit dizileri ile Peptitler sentezlenen ve antikor üretimi için tavşan bağışıklık kullanılır. HA Uni-1 epitop karşı antikor HCA-2 ve HCA-3 bölge (NA) karşı antikorlar 9 NA alt tipi bağlama kapasitesine sahip iken 13 alt tipi influenza A HA (H1-H13) bağlamak mümkün oldu. Tüm antikorlar allantoik proteinlere karşı çapraz reaktivite tespit edildiğini gözlem kanıtladığı gibi viral dizileri karşı olağanüstü özgüllük gösterdi. Bu evrensel antikorlar daha sonra spesifik antiserumlar ^7,8 gerek kalmadan aşılar influenza A HA ve NA ölçmek için slot blot testleri geliştirmek için kullanılmıştır. Aşı örnekleri çeşitli konsantrasyonlarda seyreltilmiş referans standartları ile birlikte bir yuva leke aparatı kullanarak PVDF membran üzerine uygulandı. HA tespiti için, örnekler ve standart ilk seyreltilmiş edildi Tris tamponlu salin (TBS), NA ölçümü için% 0,01 olarak Zwittergent bu koşulları içeren TBS seyreltilmiş iken 4M üre içeren algılama hassasiyetini önemli ölçüde geliştirilmiş. HA ve NA antijenleri kendi evrensel antikorlar ile immün tespiti sonrasında, sinyal intensitesi dansitometrisi tarafından ölçüldü. HA ve NA aşıların miktarları daha sonra çeşitli konsantrasyonlarda kullanılan referanslar sinyal intensitesi ile kurulmuş bir standart eğrisi kullanılarak hesaplanmıştır.

Bu antikorların, HA ve NA evrensel epitoplar bağlamak göz önüne alındığında, ilgilenen araştırmacılar sadece slot leke dışında immunoassay araştırma araçları olarak kullanabilirsiniz.

1. Reaktifler ve ekipmanların hazırlanması

1. Yuvası leke işlemine başlamadan önce, Tris-tamponlu salin (20 mM Tris, 137 mM NaCl, pH 7.6) (TBS)% 0.01 hemaglutinin HA, yuva leke, ya da 20_mls Zwittergent 4M üre çözeltisi 20_mls hazırlamak TBS, nöraminidaz veya NA, yuvası leke çözüm. 4M üre her zaman taze olarak hazırlanması gerekir iken,% 10 Zwittergent dH ₂ O bir stok solüsyonu oda sıcaklığında en az 6 ay için kararlı ve bu nedenle her bir deney önce TBS içinde% 0.01 seyrel.......

Influenza virüs HA ve NA, bu iki yüzey proteinleri bağışıklık ^{yanıtlarını} 6-11 indükleyen en önemli viral bileşenler olduğundan kantitatif tayin aşı araştırma ve geliştirme için kritik öneme sahiptir . Daha önce bu proteinlerin tespiti için rapor immünolojik yöntemler, gerginlik spesifik antikorların gerektirir. Antikorlar, sadece evrensel korunmuş epitoplar ^6-8 farkındayız beri HA ve NA antijenleri burada açıklanan ölçmek için, basit, tekrarlanabilir ve hızlı yu.......

Yazarların Bayan Monika Tocchi yazının içerik incelemesi için teşekkür etmek istiyorum. AMH, Kanada, Suudi Arabistan Kültür Bürosu aracılığıyla, Kral Abdülaziz Üniversitesi Burs tarafından desteklenmektedir.