تفاعل البلمرة سلسلة: البروتوكول الأساسي زائد استراتيجيات حل المشكلات والتحسين

في مجال العلوم البيولوجية كانت هناك التقدم التكنولوجي الذي تحظى من خلالها الانضباط في العصور الذهبية للاكتشاف. على سبيل المثال، تحولت مجال علم الأحياء المجهرية مع ظهور المجهر انطون فان يوينهويك، والتي سمحت للعلماء تصور بدائيات النوى للمرة الأولى. تطوير تفاعل البلمرة سلسلة (PCR) هي واحدة من تلك الابتكارات التي غيرت مجرى العلوم الجزيئية مع تأثيره يمتد subdisciplines لا تعد ولا تحصى في علم الأحياء. وقد ورد في النظرية من عملية Keppe وزملاء العمل في عام 1971، إلا أنها كانت آخر 14 عاما حتى إجراء PCR كاملة وصفت وتطبيقها تجريبيا من قبل كاري موليس مؤسسة قيطس بينما في عام 1985. تقدم الأتمتة وصقل هذه التقنية مع الأخذ البلمرة DNA مستقرة من البكتيريا الحرارية aquaticus المستحرات، بالتالي DNA بوليميراز طق الاسم.

PCR هو باورrful تقنية التضخيم التي يمكن أن تولد مخزون وفير من شريحة محددة من الحمض النووي (اي ان يكون AMPLICON) من كمية صغيرة فقط من المواد ابتداء (أي قالب أو تسلسل DNA الهدف). في حين واضحة وعموما خالية من المتاعب، وهناك مطبات التي تعقد رد الفعل تحقيق نتائج زائفة. عندما فشل PCR يمكن أن يؤدي إلى العديد من المنتجات DNA غير محددة ذات أحجام مختلفة التي تظهر سلم أو تشويه من العصابات على المواد الهلامية الاغاروز. في بعض الأحيان لا توجد منتجات تشكل على الإطلاق. وهناك مشكلة أخرى محتملة يحدث عندما يتم تقديمها عن غير قصد الطفرات في amplicons، مما أدى إلى السكان غير متجانسة من المنتجات PCR. يمكن فشل PCR تصبح محبطة ما لم يتم توظيف الصبر واستكشاف الأخطاء وإصلاحها لفرز دقيق وحل المشكلة (ق). هذا البروتوكول يحدد المبادئ الأساسية للPCR، ويقدم منهجية من شأنها أن تؤدي إلى التضخيم من متواليات الأكثر المستهدفة، ويقدم استراتيجيات لتحسين رد فعل. باتباع هذا دليل PCR، وسانتيجب أن تكون قادرة على udents:

• إعداد ردود الفعل وظروف ركوب الدراجات الحرارية لتجربة PCR التقليدية
• فهم وظيفة المكونات المختلفة رد الفعل وتأثيرها الكلي على تجربة PCR
• تصميم وتحسين تجربة PCR لأي قالب DNA
• فشل التجارب استكشاف PCR