Polymerase Chain Reaction: Protocole Basic Plus Stratégies de dépannage et d'optimisation

Dans le domaine des sciences biologiques, il ya eu des avancées technologiques qui catapultent la discipline dans les âges d'or de la découverte. Par exemple, le domaine de la microbiologie a été transformée avec l'avènement du microscope Anton van Leeuwenhoek, qui a permis aux scientifiques de visualiser les procaryotes pour la première fois. Le développement de la réaction en chaîne par polymérase (PCR) est une de ces innovations qui ont changé le cours de la science moléculaire avec son impact s'étend sous-disciplines de la biologie innombrables. Le processus théorique a été décrite par Keppe et ses collègues en 1971, mais il a fallu encore 14 ans jusqu'à ce que la procédure complète de PCR a été décrit et appliqué expérimentalement par Kary Mullis, tout en Cetus Corporation en 1985. Automatisation et raffinement de cette technique progressé avec l'introduction d'une ADN polymérase stable thermique de la bactérie Thermus aquaticus, par conséquent, la Taq ADN polymérase nom.

La PCR est une Powetechnique d'amplification rful qui peut générer une grande quantité d'un segment spécifique de l'ADN (c.-à-un amplicon) à partir de seulement une petite quantité de matériau de départ (par exemple, la matrice d'ADN ou la séquence cible). Bien que simple et généralement sans problème, il ya des pièges qui compliquent la réaction produisant des résultats erronés. Lorsque PCR échoue, il peut conduire à de nombreux produits d'ADN non-spécifiques de différentes tailles qui apparaissent comme une échelle ou un frottis de bandes sur des gels d'agarose. Parfois, aucun produit se former à tous. Un autre problème potentiel se produit lorsque les mutations sont introduites involontairement dans les amplicons, résultant dans une population hétérogène de produits de PCR. Échecs PCR peut devenir frustrant à moins de patience et de dépannage attention sont employées pour trier et résoudre le problème (s). Ce protocole énonce les principes fondamentaux de la PCR, fournit une méthodologie qui se traduira par l'amplification de séquences cibles la plupart des, et présente des stratégies pour optimiser une réaction. En suivant ce guide PCR, students devrait être en mesure de:

• Mettre en place des réactions et des conditions de cyclage thermique pour une expérience PCR conventionnelle
• Comprendre le fonctionnement des composants de réaction différentes et leur effet global sur une expérience de PCR
• Concevoir et optimiser une expérience de PCR pour toute matrice d'ADN
• Résoudre les problèmes liés échoué expériences de PCR