תגובת שרשרת פולימרז: פרוטוקול בסיסי פלוס אסטרטגיות לפתרון בעיות ואופטימיזציה

במדעים הביולוגיים היו ההתקדמות הטכנולוגית, כי מעוט משמעת לתוך גיל הזהב של גילוי. לדוגמה, בתחום המיקרוביולוגיה הפך עם כניסתו של המיקרוסקופ אנטון ואן לוונהוק, שאיפשרה למדענים לחזות פרוקריוטים בפעם הראשונה. התפתחות התגובה פולימראז שרשרת (PCR) הוא אחד מאותם חידושים ששינו את מהלך המדע מולקולרית עם השפעתה פורש subdisciplines אינספור בביולוגיה. תהליך תיאורטי קווי המתאר של Keppe ועמיתים לעבודה בשנת 1971, עם זאת, זה היה עוד 14 שנים עד הליך שלם PCR תואר ויישם באופן ניסיוני על ידי Kary מוליס תוך Cetus החברה בשנת 1985. אוטומציה ושכלול של טכניקה זו התקדם עם הקדמה של פולימראז ה-DNA תרמית יציבה מ aquaticus החיידק Thermus, וכתוצאה מכך פולימראז שם Taq DNA.

PCR הוא poweהגברה rful טכניקה שיכולה ליצור היצע נרחב של קטע מסוים של דנ"א (כלומר, amplicon) מתוך כמות קטנה בלבד של חומר המוצא (כלומר, תבנית ה-DNA או רצף המטרה). אמנם פשוט, ובדרך כלל ללא בעיות, יש מלכודות שיסבכו את התגובה לייצר תוצאות מזויפות. כאשר ה-PCR נכשל זה יכול להוביל שאינם ספציפיים מוצרים רבים דנ"א בגדלים שונים המופיעים כסולם או כתם של להקות על ג'ל agarose. לפעמים מוצרי שום צורה כלל. בעיה נוספת מתרחשת כאשר הפוטנציאל מוטציות פוגש בטעות ב amplicons, וכתוצאה מכך לאוכלוסייה הטרוגנית של מוצרי ה-PCR. כשלים PCR יכול להיות מתסכל, אלא אם כן סבלנות פתרון בעיות זהיר מועסקים לברר ולפתור את הבעיה (S). פרוטוקול זה מתאר את העקרונות הבסיסיים של ה-PCR, מספק מתודולוגיה יביא הגברה של רצפי היעד ביותר, מציג אסטרטגיות למיטוב התגובה. על ידי ביצוע מדריך זה PCR, רח'udents צריכים להיות מסוגלים:

• הגדר את התגובות ותנאי רכיבה תרמית לניסוי ה-PCR קונבנציונאלי
• להבין את תפקידם של מרכיבי התגובה שונים ואת השפעתם הכוללת על ניסוי ה-PCR
• עיצוב לייעל הניסוי PCR עבור כל תבנית ה-DNA
• פתרון ה-PCR ניסויים כושלים