Polymerase Chain Reaction: protocollo Basic Plus Strategies Risoluzione dei problemi e ottimizzazione

Nelle scienze biologiche ci sono stati progressi tecnologici che catapulteranno la disciplina in età d'oro della scoperta. Ad esempio, il campo della microbiologia è stato trasformato con l'avvento di microscopio Anton van Leeuwenhoek, che ha permesso agli scienziati di visualizzare procarioti per la prima volta. Lo sviluppo della reazione a catena della polimerasi (PCR) è una di quelle innovazioni che hanno cambiato il corso della scienza molecolare con il suo impatto si estende innumerevoli sottodiscipline in biologia. Il processo teorico è stato delineato dal Keppe e collaboratori nel 1971, tuttavia, è stato altri 14 anni fino a quando la procedura completa PCR è stata descritta e sperimentale applicata da Kary Mullis mentre al Cetus Corporation nel 1985. Automazione e perfezionamento di questa tecnica progredito con l'introduzione di un DNA polimerasi termica stabile dal Thermus aquaticus batterio, di conseguenza il nome DNA polimerasi Taq.

PCR è un powetecnica di amplificazione rful che può generare un ampio rifornimento di uno specifico segmento di DNA (cioè, un amplicone) da solo una piccola quantità di materiale di partenza (cioè, DNA templato o sequenza bersaglio). Anche se semplice e generalmente senza problemi, ci sono delle trappole che complicano la reazione di produzione di falsi risultati. Quando PCR non si può portare a molti prodotti non specifici di DNA di varie dimensioni che appaiono come una scala o di striscio di bande su gel di agarosio. Talvolta sono prodotti formare affatto. Un altro potenziale problema si verifica quando le mutazioni vengono involontariamente introdotti negli ampliconi, risultante in una popolazione eterogenea di prodotti di PCR. Guasti di PCR può diventare frustrante se non la pazienza e la risoluzione dei problemi attenta sono impiegati per risolvere e risolvere il problema (s). Questo protocollo illustra i principi fondamentali della PCR, fornisce una metodologia che comporta l'amplificazione di sequenze bersaglio maggior parte, e presenta le strategie per ottimizzare una reazione. Seguendo questa guida PCR, students dovrebbe essere in grado di:

• Impostare le reazioni e le condizioni termiche in bicicletta per un esperimento di PCR convenzionale
• Comprendere la funzione dei vari componenti della reazione e il loro effetto complessivo su un esperimento di PCR
• Progettare e ottimizzare un esperimento di PCR per qualsiasi modello di DNA
• Risoluzione dei problemi falliti esperimenti di PCR