ポリメラーゼ連鎖反応：基本的なプロトコルプラスのトラブルシューティングと最適化戦略

生物学の発見の黄金時代に規律をカタパルト技術の進歩がありました。例えば、微生物学の分野は​​、科学者が初めての原核生物を可視化することができアントン·ファン·レーウェンフックの顕微鏡の出現で形質転換した。ポリメラーゼ連鎖反応（PCR）の開発は、その影響は生物学で無数のsubdisciplinesにまたがると分子科学のコースを変更された技術革新の一つです。理論的なプロセスは1971年にKeppeや同僚で概説された、完全なPCR手順はシータス社の1985年の間にキャリーマリスによって記述され、実験的に適用されるまで、しかし、それは別の14年であった。この手法の自動化と洗練は、細菌サーマスのアクア 、結果的に名前のTaq DNAポリメラーゼの熱安定性DNAポリメラーゼの導入により、進行した。

PCRは、ポウです。出発材料の少量（すなわち、鋳型DNAまたは標的配列）のみからのDNAの特定のセグメント（すなわち、アンプリコン）の十分な供給を生成することができますrful増幅技術。単純な、一般的にトラブルフリーながら、誤った結果を生成する反応を複雑に落とし穴があります。 PCRが失敗したとき、それはアガロースゲル上のバンドのラダーまたはスメアとして現れ、さまざまなサイズの多くの非特異的なDNAの製品につながることができます。時々ない製品は全く形成されない。突然変異は意図せずにPCR産物の不均一な集団で、その結果、増幅産物に導入されたときに、別の潜在的な問題が発生します。忍耐と慎重なトラブルシューティングが整理し、問題（s）を解決するために採用されていない限り、PCRの失敗は、イライラになることができます。このプロトコルは、PCRの基本原理を概説し、ほとんどの標的配列の増幅をもたらす方法論を提供し、反応を最適化するための戦略を提示。このPCRガイドは、stに従うことにより、udentsのことができるようになります。

• 従来のPCR実験のための反応と熱サイクル条件を設定
• 様々な反応成分の機能とPCR実験で彼らの全体的な効果を理解する
• 任意のDNAテンプレートのPCR実験の設計と最適化
• 失敗したPCR実験のトラブルシューティング