중합 효소 사슬 반응 : 기본 프로토콜 플러스 문제 해결 및 최적화 전략

생명 공학 발견의 황금 시대로 징계를 쇠뇌 기술 진보가 있었다. 예를 들어, 미생물학 분야는 과학자들이 처음으로 prokaryotes을 시각화 수 안톤 반 리웬허크와의 현미경의 출현으로 변모되었다. 중합 효소 사슬 반응 (PCR)의 개발 미치는 영향은 생물학에서 수많은 subdisciplines를 스팬과 분자 과학의 진로를 변경 이들 혁신 중 하나입니다. 이론 과정은 1971 년에 Keppe와 동료에 의해 제시된되었다; 전체 PCR 절차 주면 주식 회사에서 1985 년 동안 Kary Mullis에 의해 설명하고 실험적으로 적용되기 전까지는하지만, 그건 다른 14년했습니다. 이 기법의 자동화 및 개선은 세균의 Thermus aquaticus의, 따라서 이름이 DNA 형성 촉매 장치의 DNA 중합 효소의 열 안정성의 DNA 중합 효소의 도입과 함께 진행.

PCR은 포웨입니다시작하는 재료만을 소량 (즉, DNA를 템플릿이나 대상 시퀀스)의 DNA (즉, amplicon)의 특정 세그먼트의 충분한 공급을 생성할 수 rful 증폭 기술. 간단하고 일반적으로 문제가없는 반면, 가짜 결과를 생산하는 반응을 복잡하게 함정이 있습니다. PCR이 실패했을 때 그것은 아가로 오스의 젤에 대한 밴드의 사다리 또는 얼룩으로 나타 다양한 규모의 다수가 아닌 특정 DNA의 제품으로 이어질 수 있습니다. 가끔 제품이 전혀 나오지. 변이가 실수로 PCR 제품의 이질적인 인구 결과, amplicons에 소개되면 또 다른 잠재적인 문제가 발생합니다. 인내와 신중 문제 해결이 정리 및 문제 (들)을 해결하기 위해 고용하지 않는 경우 PCR 실패는 절망적이 될 수 있습니다. 이 프로토콜은 PCR의 기본 원리를 설명 대부분의 대상 시퀀스의 증폭집니다 방법론을 제공하고 반응을 최적화하기위한 전략을 제시합니다. 이 PCR 가이드, 일에 따라udents는 할 수 있어야합니다 :

• 종래의 PCR 실험에 대한 반응 및 열 사이클링 조건을 설정
• 다양한 반응 구성 요소의 기능과 PCR 실험에 미치는 전반적인 영향을 이해
• 어떤 DNA를 템플릿에 대한 PCR 실험을 설계하고 최적화
• 실패 PCR 실험 문제 해결