Полимеразной цепной реакции: основные протокол Plus Устранение неполадок и оптимизация стратегии

В биологических наук были технические достижения, что катапультироваться дисциплины в золотой век открытий. Например, в области микробиологии была преобразована с появлением микроскопа Антони ван Левенгук, который позволил ученым визуализировать прокариот в первый раз. Развитие полимеразной цепной реакции (ПЦР) является одним из тех инноваций, которые изменили ход молекулярной науки с ее влияние охватывает бесчисленное поддисциплин в биологии. Теоретически процесс был намечен Keppe и его коллеги в 1971 году, однако, это было еще 14 лет, вплоть до полной процедуры ПЦР описаны и экспериментально применяться Кэри Маллис в то Cetus Корпорации в 1985 году. Автоматизация и совершенствование этой техники прогресс с внедрением тепловых стабильной ДНК-полимеразы из водяных бактерий Thermus, следовательно, ДНК-полимеразы Taq имя.

ПЦР Поуrful техника усиления, которые могут генерировать достаточный запас определенного сегмента ДНК (например, ампликона) только с небольшим количеством исходного материала (например, ДНК-матрицы или последовательности-мишени). В то время как простой и вообще без проблем, есть подводные камни, которые усложняют реакции производства ложные результаты. При ПЦР не удается, может привести ко многим неспецифический ДНК-продукты различных размеров, которые появляются как лестница или мазок из полос на агарозном геле. Иногда продукты не образуют вообще. Еще одна потенциальная проблема возникает при мутации непреднамеренно ввел в ампликонов, в результате гетерогенной популяции продуктов ПЦР. ПЦР неудачи может стать разочарование, если терпения и тщательного устранения неполадок работают, чтобы разобраться и решить проблему (ы). Этот протокол описывает основные принципы ПЦР, дает методику, которая приведет к усилению самой последовательности, цели, стратегии и представляет для оптимизации реакции. Следуя этой ПЦР руководство, улudents должны быть в состоянии:

• Настройка реакций и тепловые условия для велосипедного обычного эксперимента ПЦР
• Понимание функции различных компонентов реакции, и их общее влияние на эксперимент ПЦР
• Разработка и оптимизация ПЦР эксперимент для любого шаблона ДНК
• Устранение неполадок удалось ПЦР эксперименты