Reacción en cadena: Protocolo Básico Plus Estrategias de resolución de problemas y optimización

En las ciencias biológicas se han producido avances tecnológicos que catapultan a la disciplina en las edades de oro del descubrimiento. Por ejemplo, el campo de la microbiología se transformó con el advenimiento de microscopio Anton van Leeuwenhoek, que permitió a los científicos visualizar procariotas, por primera vez. El desarrollo de la reacción en cadena de la polimerasa (PCR) es una de las innovaciones que cambiaron el curso de la ciencia molecular, con el impacto que abarca un sinnúmero de subdisciplinas de la biología. El proceso teórico fue esbozada por Keppe y compañeros de trabajo en 1971, sin embargo, fue otro de 14 años hasta que el procedimiento completo de PCR se describe y se aplica experimentalmente por Kary Mullis, mientras que en la Cetus Corporation en 1985. Automatización y refinamiento de esta técnica progresó con la introducción de una ADN polimerasa térmica estable a partir de la bacteria Thermus aquaticus, en consecuencia, el nombre de la ADN polimerasa Taq.

La PCR es una Powetécnica de amplificación rful que puede generar un amplio suministro de un segmento específico de ADN (es decir, una amplificación) a partir de sólo una pequeña cantidad de material de partida (es decir, molde de ADN o secuencia diana). Si bien sencilla y, en general sin problemas, hay dificultades que complican la reacción que produce resultados falsos. Cuando la PCR no se puede llevar a muchos productos no específicos de ADN de diferentes tamaños que aparecen como una escalera o un frotis de bandas en geles de agarosa. A veces hay productos forman en absoluto. Otro problema potencial se produce cuando las mutaciones se introdujeron involuntariamente en los amplicones, resultando en una población heterogénea de productos de PCR. Los fallos de la PCR puede ser frustrante no ser la paciencia y la solución de problemas de cuidado se emplean para resolver y solucionar el problema (s). Este protocolo describe los principios básicos de la PCR, proporciona una metodología que se traducirá en la amplificación de secuencias de la mayoría de objetivo, y presenta estrategias para la optimización de una reacción. Siguiendo esta guía de PCR, víaudents debe ser capaz de:

• Establecer las reacciones y las condiciones de ciclos térmicos convencionales para un experimento de PCR
• Comprender la función de varios componentes de la reacción y su efecto global sobre un experimento de PCR
• Diseñar y optimizar un experimento de PCR para cualquier molde de DNA
• Solucionar problemas de fallidos experimentos de PCR