Polimeraz Zincir Reaksiyonu: Temel Protokol Plus, Sorun ve Optimizasyon Stratejileri

Biyolojik bilimler keşfin altın çağına disiplin mancınık teknolojik gelişmeler olmuştur. Örneğin, mikrobiyoloji alanında bilim adamları ilk kez prokaryotlarda görselleştirmek için izin Anton van Leeuwenhoek en mikroskop, gelişine dönüştürüldü. Polimeraz zincir reaksiyonu (PCR) geliştirilmesi etkisini biyolojinin sayısız alt disiplinleri kapsayan ile moleküler bilimin gidişatını değiştiren bu yeniliklerden biri. Teorik süreci 1971 yılında Keppe ve arkadaşları tarafından ana hatlarıyla ortaya koydu; tam PCR yöntemi Balina Corporation, 1985 yılında ise Kary Mullis tarafından açıklanan ve deneysel olarak uygulanmıştır kadar ancak, başka bir 14 yıl oldu. Bu tekniğin Otomasyon ve arıtma bakteri Thermus aquaticus, dolayısıyla adı Taq DNA polimeraz bir termal dayanıklı DNA polimeraz tanıtımıyla ilerledi.

PCR powe olduğunuBaşlangıç ​​malzemesi sadece küçük bir miktarı (yani, DNA şablonu veya hedef dizisi) DNA (yani, bir amplikon) belirli bir bölümü, zengin bir besleme oluşturabilir rful amplifikasyon tekniği. Basit ve genel olarak sorunsuz olsa da, sahte sonuçlar üreten reaksiyon komplike tuzaklar vardır. PCR başarısız olduğunda bunu agaroz jel üzerindeki bantların bir merdiven ya da smear olarak görünür büyüklü küçüklü birçok non-spesifik DNA ürünlere de yol açabilir. Bazen herhangi bir ürün hiç oluştururlar. Mutasyonlar istemeden PCR ürünlerinin heterojen nüfus sonuçlanan amplikonlar başlatıldığında diğer bir olası sorun oluşur. Sabır ve dikkatli bir sorun giderme sıralamak ve sorun (lar) çözmek için istihdam sürece PCR hataları sinir bozucu hale gelebilir. Bu protokol, PCR temel ilkelerini özetlenmektedir en hedef dizilerinin amplifikasyonu ile sonuçlanacaktır bir yöntem sağlar, ve bir reaksiyon optimize etmek için stratejiler sunar. Bu PCR kılavuzu, st takip ederekudents gerekir:

• Geleneksel PCR deney için reaksiyonlar ve ısıl koşulları ayarlama
• Çeşitli reaksiyon bileşenlerinin fonksiyonu ve PCR deney üzerindeki genel etkisi Anlayın
• Herhangi bir DNA örneğinin bir PCR deney tasarlayın ve optimize
• Başarısız PCR deneyler giderme