El-Free, Sekventiel Nucleic Acid og protein isolering

Traditionelle og nye patogener såsom enterohæmoragisk Escherichia coli (EHEC), Yersinia pestis, eller prion-baserede sygdomme er af stor bekymring for regeringer, industrier og læger verden over. For eksempel er EHECs kombineret med Shigella og ansvarlig for dødsfald på omkring 325.000 børn hvert år, og er særligt udbredt i udviklingslandene, hvor laboratorie-baseret identifikation, udbredt i USA, er ikke tilgængelig ^1. Den udvikling og distribution af lave omkostninger, kan felt-baserede, point-of-care værktøjer til at hjælpe med hurtig kortlægning og / eller diagnose af patogener eller sygdomme markører dramatisk ændre sygdomsprogression og patient prognose. Vi har udviklet et værktøj til at isolere nucleinsyrer og proteiner fra en prøve ved fastfase-ekstraktion (SPE) uden elektricitet eller tilhørende laboratorieudstyr ^2. De isolerede makromolekyler kan anvendes til diagsis enten i fremadgående laboratorium eller ved hjælp af felt-baserede point-of-care platforme. Vigtigere er denne fremgangsmåde tilvejebringer direkte sammenligning af nukleinsyre og protein data fra en ikke-spaltet prøve giver en statistisk ved bekræftelse af genomiske og proteomik analyse.

Vores isoleret værktøj anvender standard for fastfase-nukleinsyre isoleret BOOM teknologi, som isolerer nukleinsyrer fra et chaotropt salt-opløsning, sædvanligvis guanidinisothiocyanat, ved binding til silica-baserede partikler eller filtre ^3. CUBRC navnebeskyttede fastfase-ekstraktion kemi anvendes til at oprense proteinet fra chaotrope saltopløsninger, i dette tilfælde fra affald eller flow-igennem efter nukleinsyreisolering ^4.

Ved emballering velkarakteriseret kemier i en lille, billig og enkel platform har vi skabt en bærbart system til nukleinsyre og protein ekstraktion, som kan udføres under en variety betingelser. De isolerede nukleinsyrer er stabile og kan transporteres til en stilling, hvor strømmen er til rådighed for PCR-amplifikation, medens proteinindholdet umiddelbart kan analyseres ved håndholdt eller andre immunologiske assays. Den hurtige identifikation af sygdom markører i området i væsentlig grad kan ændre patientens resultat ved at dirigere den rette løbet af behandlingen på et tidligere stadium af sygdomsprogression. Værktøjet og fremgangsmåden beskrevet er egnede til anvendelse med praktisk talt enhver infektiøse agens og giver brugeren redundans af multi-makromolekylet typen analyser og samtidig reducere deres logistiske belastning.