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Biology

Electricidade-Free, Ácido Nucleico seqüencial e isolamento de proteínas

Published: May 15th, 2012

DOI:

10.3791/4202

1CUBRC, Inc., 2Department of Microbiology and Immunology, State University of New York at Buffalo, School of Medicine and Biomedical Sciences

Patógenos tradicionais e emergentes, tais como Escherichia coli entero (EHEC), Yersinia pestis, ou príon baseados doenças são de grande preocupação para governos, indústrias e profissionais da área médica em todo o mundo. Por exemplo, EHECs, combinados com Shigella, são responsáveis ​​pelas mortes de aproximadamente 325.000 crianças a cada ano e são particularmente prevalentes no mundo em desenvolvimento, onde baseado em laboratório de identificação, comum nos Estados Unidos, não está disponível 1. O desenvolvimento ea distribuição de baixo custo, baseados em campo, ponto-de cuidados de ferramentas para ajudar na identificação rápida e / ou diagnóstico de patógenos ou marcadores de doença poderia alterar drasticamente a progressão da doença eo prognóstico do paciente. Nós desenvolvemos uma ferramenta para isolar os ácidos nucleicos e proteínas a partir de uma amostra por extracção em fase sólida (SPE) sem electricidade ou equipamento associado laboratório 2. As macromoléculas isolados podem ser utilizados para diagnósticosis quer em um laboratório para a frente ou usando campo baseados no ponto-de-cuidado plataformas. É importante ressaltar que este método prevê a comparação direta de ácidos nucléicos e proteínas de dados a partir de uma amostra não-divisão, oferecendo uma confiança através de comprovação de análise genômica e proteômica.

A nossa ferramenta de isolamento utiliza o padrão da indústria de fase sólida para o isolamento de ácido nucleico, a tecnologia BOOM, que isola os ácidos nucleicos a partir de uma solução de sal caotrópico, geralmente isotiocianato de guanidina, através da ligação a base de sílica partículas ou filtros 3. Química CUBRC de extracção em fase sólida de propriedade é usado para purificar a proteína a partir de soluções de sal caotrópicos, neste caso, a partir dos resíduos ou de fluxo através após isolamento de ácido nucleico 4.

Por uma embalagem bem caracterizado químicas em uma plataforma de pequeno, barato e simples, que geraram um sistema portátil para a extracção de ácido nucleico e proteína que pode ser realizado sob uma variety de condições. Os ácidos nucleicos isolados são estáveis ​​e podem ser transportados para uma posição onde a energia está disponível para amplificação por PCR, enquanto o teor de proteína pode ser imediatamente analisadas por mão ou outros imunológica ensaios baseados. A rápida identificação de marcadores de doenças no campo poderiam alterar significativamente o resultado do paciente, orientando o curso apropriado do tratamento em um estágio anterior de progressão da doença. A ferramenta e método descritos são adequados para utilização com virtualmente qualquer agente infeccioso e dar ao utilizador a redundância de análises de tipo multi-macromolécula, reduzindo simultaneamente a sua carga logístico.

Tags

Chemistry

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