El-Free, Sekventiell nukleinsyra och protein isolering

Traditionella och nya patogener som enterohemorragisk Escherichia coli (EHEC), Yersinia pestis, eller prion-baserade sjukdomar är betydande oro för regeringar, industrier och vårdpersonal världen över. Till exempel EHECs, i kombination med Shigella, är ansvariga för dödandet av omkring 325.000 barn varje år och är särskilt vanliga i utvecklingsländer där laboratoriet-baserad identifiering, vanligt i USA, är otillgänglig ^1. Utveckling och distribution av låg kostnad, kan fält-baserade, point-of-care verktyg för att hjälpa till en snabb kartläggning och / eller diagnos av patogener eller sjukdomsmarkörer ändra dramatiskt sjukdomsutveckling och patient prognos. Vi har utvecklat ett verktyg för att isolera nukleinsyror och proteiner från ett prov genom fastfas-extraktion (SPE) utan elektricitet eller associerade laboratorieutrustning ^2. De isolerade makromolekyler kan användas för diagnossis antingen i en framåt laboratorium eller med hjälp av fält-baserade point-of-care plattformar. Viktigt är att denna metod för direkt jämförelse av nukleinsyra och data protein från en FN-split prov, som erbjuder ett förtroende genom bekräftelse av genomiska och proteomik analys.

Vår isolering verktyget utnyttjar industristandard för fast-fas-nukleinsyra isolering, BOM-teknik, som isolerar nukleinsyror från ett kaotropiskt salt-lösning, vanligtvis guanidinisotiocyanat, genom bindning till kiseldioxid-baserade partiklar eller filter ^3. CUBRC egenutvecklade fast fas extraktion kemi används för att rena protein från kaotropa saltlösningar, i detta fall, från avfall eller flödes-thru efter nukleinsyraisolering ^4.

Genom att förpackningen väl karaktäriseras kemi i en liten, billig och enkel plattform har vi genererat ett portabelt system för nukleinsyra och protein extraktion som kan utföras under en variety av betingelser. De isolerade nukleinsyrorna är stabil och kan transporteras till en position där effekt är tillgänglig för PCR-amplifiering medan den proteinhalt omedelbart kan analyseras genom handhållen eller andra immunologiska analyser. Snabb identifiering av sjukdomsmarkörer inom att kraftigt förändra patientens utfall genom att rikta rätt behandling vid ett tidigare skede av sjukdomsförloppet. Verktyget och metoden beskrivs är lämpliga för användning med i stort sett smittämnen och erbjuder användaren uppsägning av flera makromolekyl typ analyser samtidigt minska deras logistiska börda.