Undersøqelse DNA-skader i hippocampus neuroner Brug af Comet Assay

En række lægemidler rettet mod de DNA-reparationsmekanismer og inducerer celledrab ved at skabe DNA-beskadigelse. Således har fremgangsmåder til direkte måler DNA-skader blevet omfattende evalueret. Traditionelle metoder er tidskrævende, dyre, ressource-intensive og kræver replikerende celler. I modsætning hertil er comet assay, en enkelt celle gelelektroforese assay, en hurtigere, non-invasiv, billig, direkte og følsomt mål for DNA-skader og reparation. Alle former for DNA-skader samt DNA-reparation kan visualiseres på enkelt celle niveau ved hjælp af dette kraftfulde teknik.

Princippet for kometen assay er, at intakt DNA er meget ordnet hvorimod DNA-skader forstyrrer denne organisation. De beskadigede DNA trænger ind i agarosematrix og når den udsættes for et elektrisk felt, det negativt ladede DNA vandrer mod katoden, som er positivt ladet. De store ubeskadigede DNA-strenge er ikke i stand til at migrere langt fra kernen. DNA-beskadigelseskaber mindre DNA-fragmenter, der rejser længere end den intakte DNA. Comet assay, et billedanalyse-software, foranstaltninger og sammenligner den samlede fluorescerende intensitet af DNA'et i kernen med DNA, der er migreret ud af kernen. Fluorescerende signal fra migrerede DNA er proportional med DNA-beskadigelse. Længere lysere DNA hale betyder øget DNA-skader. Nogle af de parametre, der måles, er tail moment, som er et mål for både mængden af ​​DNA og fordeling af DNA i halen, halelængde og procentdel af DNA i halen. Dette assay kan måle DNA-reparation samt da opløsning af DNA-skader betyder reparationen har fundet sted. Grænsen for følsomhed er omkring 50 strengbrud pr diploid pattedyrcelle ^1,2. Celler behandles med DNA-beskadigende midler, såsom etoposid, kan anvendes som en positiv kontrol. Således comet assay er en hurtig og effektiv procedure til at måle DNA-skader.