Le dosage de dommages de l'ADN dans les neurones hippocampiques Utilisation de l'essai de comète

Un certain nombre de médicaments ciblent les voies de réparation de l'ADN et induire des cellules tuer en créant des lésions de l'ADN. Ainsi, des procédés pour mesurer directement lésions de l'ADN ont été largement évalués. Les méthodes traditionnelles sont longs, coûteux, et nécessitent beaucoup de ressources de réplication des cellules. En revanche, le test des comètes, un essai de cellule unique électrophorèse sur gel, est plus rapide, non invasif, peu coûteux, mesure directe et sensible de dommages à l'ADN et la réparation. Toutes les formes de dommages à l'ADN ainsi que réparation de l'ADN peut être visualisé au niveau de la cellule unique à l'aide de cette technique puissante.

Le principe qui sous-tend le test des comètes est que l'ADN intact est très ordonnée alors dommages à l'ADN perturbe cette organisation. Les suintements d'ADN endommagés dans la matrice d'agarose et lorsqu'il est soumis à un champ électrique, l'ADN chargé négativement migre vers la cathode qui est chargée positivement. Les brins d'ADN endommagés grands ne sont pas en mesure de migrer loin du noyau. Dommages à l'ADNcrée des fragments d'ADN plus petits qui voyagent plus loin que l'ADN intact. Comet Assay, un logiciel d'analyse d'images, mesures et compare l'intensité globale fluorescent de l'ADN dans le noyau avec l'ADN qui a migré hors du noyau. Signal fluorescent de l'ADN migré est proportionnelle à endommager l'ADN. ADN queue plus claire signifie lésions de l'ADN accrue. Certains des paramètres qui sont mesurés sont actuellement queue qui est à la fois une mesure de la quantité d'ADN et de la distribution de l'ADN dans la queue de longueur de queue, et le pourcentage d'ADN dans la queue. Ce test permet de mesurer réparation de l'ADN ainsi car la résolution des lésions de l'ADN signifie la réparation a eu lieu. La limite de sensibilité est d'environ 50 cassures par ^1,2 cellule diploïde mammalien. Les cellules traitées avec des agents endommageant l'ADN, tels que l'étoposide, peut être utilisé en tant que contrôle positif. Ainsi, le test des comètes est une procédure rapide et efficace pour mesurer dommages à l'ADN.