Procedure for Decellularization af porcin Heart ved retrograd Coronarperfusionstrykket

Perfusion baseret helt organ decellularization har for nylig fået interesse inden for tissue engineering som et middel til at skabe stedspecifikke ekstracellulære matrix scaffolds, mens de stort set bevarer den native struktur af stilladset. Til dato er denne fremgangsmåde blevet anvendt i en række forskellige organsystemer, herunder hjerte, lunge og lever ^1-5. Tidligere decellularization metoder for væv uden en let tilgængelig vaskulære netværk har påberåbt langvarig udsættelse af væv til opløsninger af vaske-og rengøringsmidler, syrer eller enzymatiske behandlinger som et middel til at fjerne de cellulære og nukleare komponenter fra det omgivende ekstracellulære miljø ^6-8. Imidlertid effektiviteten af ​​disse metoder hængslet af evnen af ​​opløsningerne gennemtrænger vævet ved diffusion. I modsætning hertil effektivt perfusion af organer gennem naturlige vaskulære system reducerede diffusionsafstanden og lettet transport af decellularizatipå midler ind i vævet og cellulære komponenter ud af vævet. Heri, beskriver vi en fremgangsmåde til fuldt decellularize et intakt porcin hjerte gennem koronar retrograd perfusion. Protokollen gav et fuldt decellulariseret hjerte ekstracellulære matrix (c-ECM) stillads med den tredimensionale struktur af hjertet intakt. Vores metode en række enzymer, detergenter og syrer kombineret med hypertoniske og hypotonisk skylninger for at hjælpe med lysering og fjernelse af celler. Protokollen anvendt en trypsinopløsning at frigøre celler fra matrixen efterfulgt af Triton X-100 og natriumdeoxycholat opløsninger til hjælp ved fjernelse af cellemateriale. Den beskrevne protokol anvender også perfusion hastigheder på over 2 L / min i længere tid. Den høje strømningshastighed, kombineret med opløsning ændres tilladt transport af midler til vævet uden forurening af cellerester og sikret en effektiv skylning af vævet. Den beskrevne metode fjernede alt nukleart materiale fra Native porcint hjertevæv, hvilket skaber en stedspecifik hjerte ECM stillads, der kan anvendes til en lang række applikationer.