Potentiel de membrane Dye Imaging de ventromédian hypothalamus neurones de souris adulte à étudier Glucose Sensing

L'activité des neurones isolés à partir de souris adultes, âgées peut être étudiée en dissociant les neurones à partir de régions spécifiques du cerveau et en utilisant l'imagerie de colorant potentiel de membrane fluorescent. Par les réponses de test à des changements dans le glucose, cette technique peut être utilisée pour étudier la sensibilité au glucose des neurones hypothalamiques ventromédians adultes.

Les études de l'activité neuronale sont souvent effectuées à l'aide de neurones rongeurs moins de 2 mois d'âge en raison des difficultés techniques liées à l'augmentation du tissu conjonctif et une diminution de la viabilité neuronale qui se produisent avec l'âge. Ici, nous décrivons une méthodologie pour la dissociation des neurones hypothalamiques sains provenant de souris adultes âgés. La possibilité d'étudier les neurones de souris adultes d'âge permet l'utilisation de modèles de maladies qui se manifestent à un âge plus avancé et peut-être plus de développement précis pour certaines études. L'imagerie par fluorescence des neurones dissociés peut être utilisé pour étudier l'activité d'une population de neurones, par opposition à l'aide d'électrophysiologie pour étudier un seul neurone. Ceci est particulièrement utile lors de l'étude d'une population neuronale hétérogène dans lequel le type désiré neuronale est rare tel que de neurones hypothalamiques de détection de glucose. Nous avons utilisé le potentiel de membrane imagerie de colorant de neurones hypothalamiques ventromédian adultes d'étudier leurs réponses à changes de glucose extracellulaire. Neurones glucose de détection sont soupçonnés de jouer un rôle dans la régulation centrale de l'équilibre énergétique. La possibilité d'étudier la détection du glucose chez les rongeurs adultes est particulièrement utile, car la prédominance des maladies liées à l'équilibre de l'énergie dysfonctionnel (par exemple. L'obésité) augmente avec l'âge.

Le cerveau régule l'homéostasie énergétique par la neuro-endocrinien et nerveux autonome. L'hypothalamus ventromédian (VMH), composé du noyau ventromédian (VMN) et le noyau arqué (ARC), est important pour la régulation centrale de l'homéostasie énergétique. Neurones spécialisés de détection du glucose, dans le VMH, lien l'activité neuronale et l'homéostasie du glucose périphérique ^1. Il existe deux types de glucose détection neurones; glucose excités (GE) neurones augmentent tandis que le glucose inhibe (GI) neurones diminuent leur activité glucose augmente extracellulaires. Neurones VMH glucose de détection sont généralement étudiés en....

Une. Animaux

1. Toutes les procédures ont été approuvées par l'établissement de soins et d'utilisation des animaux Comité à l'Université de médecine et de dentisterie du New Jersey.
2. maison de groupe mâle C57BL / 6 sur un programme de sombre lumière/12 h 12 h et de permettre l'accès ad libitum à l'eau et de la nourriture. Sacrifier à l'âge de 4-5 mois. L'euthanasie des souris a été effectuée en utilisant le plan de l'anesthésie chirurgicale et .......

La dissection précise du VMH l'écart des autres zones hypothalamiques est important d'obtenir des résultats cohérents. L'inclusion d'autres domaines pourrait diluer la population neuronale VMH, changer le% de neurones dépolarisés calculées. En outre, les neurones de détection de glucose ont été identifiées dans d'autres régions hypothalamiques, tels que l'hypothalamus latéral, qui peut différer fonctionnellement et mécaniquement à partir de la détection de glucose dans les neuron.......

La clé pour être en mesure d'étudier l'activité des neurones de souris adultes est la capacité de dissocier les neurones sains. La dissociation des neurones hypothalamiques de souris adultes est plus difficile à plusieurs étapes clés du protocole par rapport aux neurones de souris juvéniles. Nous avons surmonté ce problème dans un certain nombre de façons. Faire des tranches épaisses de 500 um de cerveau minimise les dégâts mécaniques aux neurones par rapport aux habituels 250-350 um tranches uti.......

NIH R01 DK55619, NIH R21 CA139063