झिल्ली वयस्क चूहों से ventromedial Hypothalamus न्यूरॉन्स की संभावित डाई इमेजिंग ग्लूकोज सेंसिंग अध्ययन करने के लिए

Published: November 27th, 2013

DOI:

10.3791/50861

Reema P. Vazirani¹, Xavier Fioramonti², Vanessa H. Routh¹

¹Department of Pharmacology and Physiology, Rutgers New Jersey Medical School, ²Center for Taste and Feeding Behavior, Universite de Bourgogne

वयस्क आयु वर्ग के चूहों से एकल न्यूरॉन्स की गतिविधियों विशिष्ट मस्तिष्क क्षेत्रों से न्यूरॉन्स अलग कर और फ्लोरोसेंट झिल्ली संभावित डाई इमेजिंग का उपयोग करके अध्ययन किया जा सकता है. ग्लूकोज में परिवर्तन करने के लिए परीक्षण प्रतिक्रियाओं से, यह तकनीक वयस्क ventromedial हाइपोथैलेमस न्यूरॉन्स की ग्लूकोज संवेदनशीलता का अध्ययन करने के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है.

Neuronal गतिविधि का अध्ययन अक्सर कारण बढ़ रही संयोजी ऊतक के साथ जुड़े तकनीकी कठिनाइयों को कृन्तकों उम्र के कम से कम 2 महीने से न्यूरॉन्स का उपयोग किया जाता है और उम्र के साथ होते हैं कि neuronal व्यवहार्यता घट रहे हैं. यहाँ, हम वयस्क आयु वर्ग के चूहों से स्वस्थ hypothalamic न्यूरॉन्स की हदबंदी के लिए एक पद्धति का वर्णन. वयस्क आयु वर्ग के चूहों से न्यूरॉन्स अध्ययन करने की क्षमता एक बाद की उम्र में प्रकट और कुछ अध्ययनों के लिए अधिक developmentally सही हो सकता है कि बीमारी मॉडल के उपयोग की अनुमति देता है. एक न्यूरॉन का अध्ययन करने के इलेक्ट्रोफिजियोलॉजी का उपयोग करने के लिए विरोध के रूप में अलग न्यूरॉन्स के प्रतिदीप्ति इमेजिंग, न्यूरॉन्स की आबादी की गतिविधि का अध्ययन करने के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है. वांछित neuronal प्रकार इस तरह के हाइपोथैलेमस ग्लूकोज संवेदन न्यूरॉन्स के लिए के रूप में दुर्लभ है जिसमें एक विषम neuronal आबादी का अध्ययन करने पर यह विशेष रूप से उपयोगी है. हम चा करने के लिए उनकी प्रतिक्रियाओं का अध्ययन करने के लिए वयस्क ventromedial hypothalamic न्यूरॉन्स की झिल्ली संभावित डाई इमेजिंग उपयोगकोशिकी ग्लूकोज में nges. ग्लूकोज संवेदन न्यूरॉन्स ऊर्जा संतुलन के केंद्रीय विनियमन में एक भूमिका निभा माना जाता है. वयस्क कृन्तकों में ग्लूकोज संवेदन अध्ययन करने की क्षमता बेकार ऊर्जा संतुलन (जैसे. मोटापा) उम्र के साथ वृद्धि से संबंधित रोगों की प्रबलता के बाद से विशेष रूप से उपयोगी है.

मस्तिष्क neuroendocrine और स्वायत्त तंत्रिका प्रणाली के माध्यम से ऊर्जा homeostasis को नियंत्रित करता है. ventromedial हाइपोथेलेमस (VMH), ventromedial नाभिक (VMN) और धनुषाकार नाभिक (एआरसी) के शामिल, ऊर्जा homeostasis के केंद्रीय विनियमन के लिए महत्वपूर्ण है. विशिष्ट ग्लूकोज संवेदन न्यूरॉन्स, VMH भीतर, neuronal गतिविधि और परिधीय ग्लूकोज homeostasis ¹ लिंक. ग्लूकोज उत्साहित (जीई) ग्लूकोज (सैनिक) न्यूरॉन्स कोशिकी ग्लूकोज बढ़ जाती है के रूप में अपनी गतिविधि को कम हिचकते हैं, जबकि न्यूरॉन्स वृद्धि, न्यूरॉन्स संवेदन ग्लूकोज के दो प्रकार के होते हैं. VMH ग्लूकोज संवेदन न्यूरॉन्स आम तौर पर इलेक्ट्रोफिजियोलॉजी या कैल्शियम / झिल्ली संभावित संवेदनशील डाई इमेजिंग अध्य....

1. पशु

सभी प्रक्रियाओं न्यू जर्सी के संस्थागत पशु की देखभाल और उपयोग चिकित्सा विश्वविद्यालय में समिति और दंत चिकित्सा द्वारा अनुमोदित किया गया.
समूह घर पुरुष C57BL 6 / एक 12 घंटा light/12 घंटा अंधेरे समय पर.......

दूर अन्य हाइपोथैलेमस क्षेत्रों से VMH की सटीक विच्छेदन अनुरूप परिणाम प्राप्त करने के लिए महत्वपूर्ण है. अन्य क्षेत्रों के शामिल किए जाने की गणना depolarized न्यूरॉन्स का% बदल रहा है, VMH neuronal आबादी को कमजोर कर सकता .......

वयस्क चूहों से न्यूरॉन्स की गतिविधियों का अध्ययन करने में सक्षम होने की कुंजी स्वस्थ न्यूरॉन्स अलग कर देना करने की क्षमता है. वयस्क चूहों से hypothalamic न्यूरॉन्स की हदबंदी किशोर चूहों से न्यूरॉन्स की तुलना.......

एनआईएच R01 DK55619, एनआईएच R21 CA139063

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Name	Company	Catalog Number	Comments
Neurobasal-A Medium (Custom)	Invitrogen	0050128DJ	custom made glucose free
Hibernate-A Medium (Custom)	BrainBits		custom made glucose free
Penicillin streptomycin (20,000 U/ml)	Invitrogen	15140	other vendors acceptable
Stericup vacuum filter units (0.22 μm)	Millipore		other vendors acceptable
25 mm Glass coverslips	Warner	#1 25mm round
18 mm Glass coverslips	Warner	#1 18mm round
GlutaMAX	Invitrogen	35050
B27 minus insulin (50x)	Invitrogen	0050129SA
Razor blade	VWR	55411
Vibratome & cooling chamber	Vibratome	Series 1000 Sectioning system
Vibratome blades	Polysciences	22370	injector or double edge blades from other vendors acceptable
Papain, suspension	Worthington	LS003124
BSA, suitable for cell culture	Sigma		other vendor acceptable
DNAse, for cell culture	Invitrogen		other vendor acceptable
cloning cylinders, 6 mm x 8 mm	Bellco Glass	2090-00608
Membrane Potential Dye (blue)	Molecular Devices	R8042
In-line heater	Warner	SF-28
Syringe pumps	WPI	sp100i	other vendor acceptable
Closed chamber	Warner	RC-43C
Polyethylene tubing	Warner	PE-90
Metamorph	Molecular Devices		alternate image analysis software acceptable
Microscope	Olympus	BX61 WI	used with 10X objective
Camera	Photometrics	Cool Snap HQ
Narrow Cy3 Filter Set	Chroma	41007a
Illumination System	Sutter Instruments	Lambda DG-4

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