Summary
Abstract
Introduction
Protocol
Representative Results
Discussion
Acknowledgements
Materials
References
Medicine
تشكل الأورام الدبقية الخبيثة مجموعة غير متجانسة من الأورام الدبقية عالية التسلل ذات السمات السريرية والجزيئية المتميزة. الزينوغرافتات التقويمية الأولية تلخص السمات النسيجية والجزيئية للأنواع الفرعية الخبيثة من الورم الدبقي في نماذج الحيوانات قبل السريرية.
تشكل الأورام الدبقية الخبيثة مجموعة غير متجانسة من الأورام الدبقية عالية التسلل ذات السمات السريرية والجزيئية المتميزة. الزينوغرافتات التقويمية الأولية تلخص السمات النسيجية والجزيئية للأنواع الفرعية الخبيثة من الورم الدبقي في نماذج الحيوانات قبل السريرية. ولنمذجة الأورام الدبقية الخبيثة من الدرجتين الثالثة والرابعة لمنظمة الصحة العالمية في مقايسات الزرع، يتم نقل الخلايا السرطانية البشرية إلى موقع تقويم العظام، الدماغ، للفئران المنافضة للمناعة. على النقيض من xenografts الثانوية التي تستخدم الخلايا السرطانية المستزرعة ، يتم فصل خلايا الورم الدبقي البشري عن العينات المستئصالة وزرعها دون مرور مسبق في زراعة الأنسجة لتوليد xenografts الأولية. الإجراء في هذا التقرير تفاصيل إعداد عينة الورم، وزرع داخل الجمجمة في الفئران منقوصة المناعة، ورصد لengraftment الورم وحصاد الورم لتمرير لاحقة إلى الحيوانات المتلقية أو التحليل. يتطلب إعداد الخلايا السرطانية ساعتين وتتطلب العملية الجراحية 20 دقيقة /.
الأورام الدبقية الخبيثة هي أورام الدبقية الأولية في الجهاز العصبي المركزي التي تحدث في الدماغ وأحيانا في الحبل الشوكي. تصنف منظمة الصحة العالمية الأورام الدبقية وفقا للتشابه النسيجي مع الخلايا الفلكية أو أوليغودندروسيتوس أو الخلايا النعجلية ثم يتم تصنيفها رقميا (من الأول إلى الرابع) للسمات المرضية للأورام الخبيثة. الأنواع الفرعية الهسولوجية الأكثر شيوعا هي السيتوسيتوماس، الأورام الأوليغوديندروغليوماس والقلة المختلطة. وتتميز الأورام الدبقية الخبيثة التي تشمل الصفوف من الثاني إلى الرابع لمنظمة الصحة العالمية بالنمو الغازي والتكسير إلى العلاجات الحالية. في كل عام في الولايات المتحدة ، يتم تشخيص ما يقرب من 15750 شخصا بورم جلي خبيث ويستسلم ما يقدر ب 12740 مريضا لهذا المرض.....
1. إعداد تعليق الخلايا السرطانية
ملاحظة: مطلوب موافقات مؤسسية مناسبة لاستخدام مواد المريض والحيوانات لإنشاء وصيانة الأورام الدبقية العظام الأولية xenografts. في المركز الطبي لجامعة فاندربيلت، يتم جمع مواد الورم التي تم استئصالها التي تتجاوز تلك المطلوبة لأغراض التشخي.......
يتم زرع خلايا الورم الدبقي المفككة مباشرة في أدمغة الفئران المنافرة المناعية للحصول على خطوط زينوغرافت تقويم العظام الأولية. يتم تعيين كل عينة ورم عدد عشوائي قبل زرعها، كجزء من عملية إلغاء تحديد هوية لإزالة المعلومات الصحية المحمية. نحن نستخدم رقم قاعدة بيانات REDcap مكون من 5 أرقام لهذا الغ.......
خطوط الخلايا المستزرعة، xenografts والفئران المعدلة وراثيا هي الطرق الأكثر شيوعا لنمذجة الأورام الدبقية، وهناك فوائد والقيود المتميزة لكل نظام نموذج3،13،14. وتشمل الفوائد ذات الصلة من الأورام الدبقية العظام الأولية xenografts النمو المتسلل الذي يطبع الأورام الدبقية المنتشرة والاحتفاظ بالتغ.......
نحن مدينون بشكل خاص للمرضى في المركز الطبي لجامعة فاندربيلت الذين قدموا مواد بحثية لا تقدر بثمن لبنك الأنسجة العصبية الجزيئية. نشكر أولئك الذين أنشأوا وحافظوا على بنك الأنسجة، وريد C. طومسون MD (المحقق الرئيسي)، تشيريل كينارد RN (ممرضة أبحاث) ولاري أ. بيرس MS (مدير). تم تنفيذ الخدمات النسيجية ، جزئيا ، من قبل المركز الطبي لجامعة فاندربيلت (VUMC) الموارد المشتركة في علم الأمراض الترجمي (بدعم من الجائزة 5P30 CA068485 لمركز فاندربيلت إنغرام للسرطان). وقد تم دعم هذا العمل من خلال منح قدمت إلى MKC من صناديق التنمية NINDS (1R21NS070139) وصندوق بوروز ويلكوم وصناديق التنمية VMC. ويدعم MKC من قبل وزارة شؤون المحاربين القدامى، إدارة صحة المحاربين القدامى، مكتب البحث والتطوير، ا....
Name | Company | Catalog Number | Comments |
Phosphate buffered saline |
Life Technologies |
14040-133 | |
Papain dissociation system |
Worthington Biochemical Corp. |
LK003150 | |
Trypan blue solution 0.4% |
Life Technologies |
15250061 | |
Ketamine HCl |
Obtained from institutional pharmacy or local veterinary supply company | ||
Xylazine HCl | |||
Ketoprofen | |||
Ophthalmic ointment | |||
Povidone-iodine |
Fisher Scientific |
190061617 | |
Cryopreservation medium and proliferation supplement |
StemCell Technologies |
05751 | |
0.2% Heparin sodium salt in PBS |
StemCell Technologies |
07980 | |
Penicillin-streptomycin |
Life Technologies |
15140-122 | |
Dimethyl sulfoxide |
Sigma-Aldrich |
D6250-5X10ML | |
NOD.Cg-Prkdcscid I/2rgtm1Wjl/SzJ mice |
The Jackson Laboratory |
005557 |
NSG mice |
Anti-human vimentin antibody |
Dako |
M7020 |
Use 1:200 to 1:800 |
Anti-human IDH1 R132H antibody |
Dianova |
DIA-H09 |
Use 1:100 to 1:400 |
Material |
Company |
Catalogue Number |
Comments |
Centrifuge with swinging bucket rotor | |||
Pipetter with dispensing speed control | |||
Disposable hemocytometer |
Fisher Scientific |
22-600-100 | |
Sterile surgical gloves |
Fisher Scientific |
11-388128 | |
Disposable gown |
Fisher Scientific |
18-567 | |
Surgical mask |
Fisher Scientific |
19-120-1256 | |
Tuberculin syringe |
BD |
305620 | |
Alcohol pads |
Fisher Scientific |
22-246-073 | |
Portable electronic scale |
Fisher Scientific |
01-919-33 | |
Zoom stereomicroscope | |||
Surgical clipper |
Stoelting |
51465 | |
Scalpel handle |
Fine Science Tools |
10003-12 | |
Scalpel blades, #10 | |||
Stereotaxic instrument |
Stoelting |
51730 | |
High-speed drill |
Stoelting |
51449 | |
Drill bit, 0.6 mm | Stoelting | 514552 | |
Hamilton syringe |
Hamilton |
80336 | |
Autoclip, 9 mm |
BD |
427630 | |
Circulating water warming pad |
Kent Scientific |
TP-700 TP-1215EA | |
Hot bead dry sterilizer |
Kent Scientific |
INS300850 | |
Surgical scissors |
Fine Science Tools |
14101-14 | |
Fine scissors |
Fine Science Tools |
14094-11 | |
Spring scissors |
Fine Science Tools |
15018-10 | |
Dumont forceps |
Fine Science Tools |
11251-30 | |
Semimicro spatulas |
Fisher Scientific |
14374 | |
Mouse brain slicer matrix |
Zivic Instruments |
BSMAS002-1 | |
Cryogenic storage vials |
Fisher Scientific |
12-567-501 |
ABOUT JoVE
Copyright © 2024 MyJoVE Corporation. All rights reserved