Summary
Abstract
Introduction
Protocol
Representative Results
Discussion
Acknowledgements
Materials
References
Medicine
Maligne gliomer udgør en heterogen gruppe af stærkt infiltrerende glial neoplasmer med forskellige kliniske og molekylære træk. Primære ortopiske xenografter opsummerer de histopatologiske og molekylære træk ved ondartede gliomundertyper i prækliniske dyremodeller.
Maligne gliomer udgør en heterogen gruppe af stærkt infiltrerende glial neoplasmer med forskellige kliniske og molekylære træk. Primære ortopiske xenografter opsummerer de histopatologiske og molekylære træk ved ondartede gliomundertyper i prækliniske dyremodeller. Til model WHO kvaliteter III og IV ondartede gliomer i transplantation assays, menneskelige tumorceller er xenografted i en orthotopic site, hjernen, af immunkompromitterede mus. I modsætning til sekundære xenografts, der bruger dyrkede tumorceller, er humane glioma celler dissociated fra resected prøver og transplanteret uden forudgående passage i vævskultur til at generere primære xenografts. Proceduren i denne rapport detaljer tumor prøve forberedelse, intrakraniel transplantation i immunkompromitterede mus, overvågning for tumor engraftment og tumor høst for efterfølgende passage i recipient dyr eller analyse. Tumor celle forberedelse kræver 2 timer og kirurgisk procedure kræver 20 min / dyr.
Maligne gliomer er primære glia tumorer i centralnervesystemet, der forekommer i hjernen og lejlighedsvis rygmarven. Gliomer er klassificeret af Verdenssundhedsorganisationen (WHO) i henhold til histologiske lighed med astrocytter, oligodendrocytter eller ependymale celler og derefter numerisk klassificeret (I til IV) for patologiske træk ved malignitet. De mest almindelige histologiske undertyper er astrocytomas, oligodendrogliomas og blandede oligoastrocytomas. Maligne gliomer, der omfatter WHO-kvaliteter II til IV, er kendetegnet ved invasiv vækst og genstridige til nuværende behandlingsformer. Hvert år i USA, ca 15.750 personer er diagnosticeret med en ondartet gl....
1. Forberedelse af tumorcelle suspension
Bemærk: Der kræves passende institutionelle godkendelser til brug af patientmateriale og -dyr for at etablere og vedligeholde primære ortopiske gliom xenografter. På Vanderbilt University Medical Center indsamles resected tumormateriale, der overstiger det, der kræves til diagnostiske formål, med patientens samtykke til et forskningsvævslager. Prøverne er mærket med et randomiseret 5-cifret REDcap-databasenummer, og alle patient.......
Dissociated glioma celler transplanteres direkte ind i hjernen hos immunkompromitterede mus for at opnå primære ortopiske xenograft linjer. Hver tumorprøve tildeles et randomiseret tal før transplantation som en del af afidentifikationsprocessen for at fjerne beskyttede sundhedsoplysninger. Vi bruger et 5-cifret REDcap-databasenummer til dette formål. Figur 1 illustrerer processen og nomenklaturen for etablering af en xenograftlinje fra et glioblastoma (GBM 17182) med isocitratdehydrogenase 1 (IDH1).......
Dyrkede cellelinjer, xenografts og genetisk manipulerede mus er de mest almindelige metoder til modellering af gliomer, og der er forskellige fordele og begrænsninger for hvert modelsystem3,13,14. Relevante fordele ved primære ortopiske glioma xenografts omfatter infiltrerende vækst, der kendetegner diffuse gliomer og fastholdelse af genetiske ændringer og vigtige signalmekanismer, der kan være overordentlig vanskeligt at opretholde i dyrkede gliomceller. For eksempel kan isocitrat dehydrogenase .......
Vi står især i gæld til patienter på Vanderbilt University Medical Center, der leverede uvurderligt forskningsmateriale til Molecular Neurosurgical Tissue Bank. Vi takker dem, der etablerede og vedligeholder Tissue Bank, Reid C. Thompson MD (principal investigator), Cherryl Kinnard RN (forskningssygeplejerske) og Larry A. Pierce MS (manager). Histologiske tjenester blev delvist udført af Vanderbilt University Medical Center (VUMC) Translational Pathology Shared Resource (støttet af tildeling 5P30 CA068485 til Vanderbilt-Ingram Cancer Center). Dette arbejde blev støttet af tilskud til MKC fra NINDS (1R21NS070139), Burroughs Wellcome Fund og VMC udviklingsmidler. MKC er....
Name | Company | Catalog Number | Comments |
Phosphate buffered saline |
Life Technologies |
14040-133 | |
Papain dissociation system |
Worthington Biochemical Corp. |
LK003150 | |
Trypan blue solution 0.4% |
Life Technologies |
15250061 | |
Ketamine HCl |
Obtained from institutional pharmacy or local veterinary supply company | ||
Xylazine HCl | |||
Ketoprofen | |||
Ophthalmic ointment | |||
Povidone-iodine |
Fisher Scientific |
190061617 | |
Cryopreservation medium and proliferation supplement |
StemCell Technologies |
05751 | |
0.2% Heparin sodium salt in PBS |
StemCell Technologies |
07980 | |
Penicillin-streptomycin |
Life Technologies |
15140-122 | |
Dimethyl sulfoxide |
Sigma-Aldrich |
D6250-5X10ML | |
NOD.Cg-Prkdcscid I/2rgtm1Wjl/SzJ mice |
The Jackson Laboratory |
005557 |
NSG mice |
Anti-human vimentin antibody |
Dako |
M7020 |
Use 1:200 to 1:800 |
Anti-human IDH1 R132H antibody |
Dianova |
DIA-H09 |
Use 1:100 to 1:400 |
Material |
Company |
Catalogue Number |
Comments |
Centrifuge with swinging bucket rotor | |||
Pipetter with dispensing speed control | |||
Disposable hemocytometer |
Fisher Scientific |
22-600-100 | |
Sterile surgical gloves |
Fisher Scientific |
11-388128 | |
Disposable gown |
Fisher Scientific |
18-567 | |
Surgical mask |
Fisher Scientific |
19-120-1256 | |
Tuberculin syringe |
BD |
305620 | |
Alcohol pads |
Fisher Scientific |
22-246-073 | |
Portable electronic scale |
Fisher Scientific |
01-919-33 | |
Zoom stereomicroscope | |||
Surgical clipper |
Stoelting |
51465 | |
Scalpel handle |
Fine Science Tools |
10003-12 | |
Scalpel blades, #10 | |||
Stereotaxic instrument |
Stoelting |
51730 | |
High-speed drill |
Stoelting |
51449 | |
Drill bit, 0.6 mm | Stoelting | 514552 | |
Hamilton syringe |
Hamilton |
80336 | |
Autoclip, 9 mm |
BD |
427630 | |
Circulating water warming pad |
Kent Scientific |
TP-700 TP-1215EA | |
Hot bead dry sterilizer |
Kent Scientific |
INS300850 | |
Surgical scissors |
Fine Science Tools |
14101-14 | |
Fine scissors |
Fine Science Tools |
14094-11 | |
Spring scissors |
Fine Science Tools |
15018-10 | |
Dumont forceps |
Fine Science Tools |
11251-30 | |
Semimicro spatulas |
Fisher Scientific |
14374 | |
Mouse brain slicer matrix |
Zivic Instruments |
BSMAS002-1 | |
Cryogenic storage vials |
Fisher Scientific |
12-567-501 |
ABOUT JoVE
Copyright © 2024 MyJoVE Corporation. All rights reserved