Summary
Abstract
Introduction
Protocol
Representative Results
Discussion
Acknowledgements
Materials
References
Medicine
Kwaadaardige gliomen vormen een heterogene groep van zeer infiltratieve gliane neoplasmata met duidelijke klinische en moleculaire kenmerken. Primaire orthotopische xenograften heroveren de histopathologische en moleculaire kenmerken van kwaadaardige glioomsubtypes in preklinische diermodellen.
Kwaadaardige gliomen vormen een heterogene groep van zeer infiltratieve gliane neoplasmata met duidelijke klinische en moleculaire kenmerken. Primaire orthotopische xenograften heroveren de histopathologische en moleculaire kenmerken van kwaadaardige glioomsubtypes in preklinische diermodellen. Om who-graad III en IV kwaadaardige gliomen te modelleren in transplantatietesten, worden menselijke tumorcellen ge xenografeerd in een orthotopische plaats, de hersenen, van immuungecompromitteerde muizen. In tegenstelling tot secundaire xenograften die gekweekte tumorcellen gebruiken, worden menselijke glioomcellen gescheiden van gereseceerde monsters en getransplanteerd zonder voorafgaande passage in weefselkweek om primaire xenograften te genereren. De procedure in dit rapport beschrijft de voorbereiding van tumormonsters, intracraniële transplantatie in immuungecompromitteerde muizen, monitoring op tumorengraftment en tumoroogst voor latere passage in ontvangende dieren of analyse. Tumorcelvoorbereiding vereist 2 uur en chirurgische procedure vereist 20 minuten / dier.
Kwaadaardige gliomen zijn primaire gliatumoren van het centrale zenuwstelsel die voorkomen in de hersenen en af en toe het ruggenmerg. Gliomen worden door de Wereldgezondheidsorganisatie (WHO) geclassificeerd op basis van histologische gelijkenis met astrocyten, oligodendrocyten of ependymale cellen en vervolgens numeriek ingedeeld (I tot IV) voor pathologische kenmerken van maligniteit. De meest voorkomende histologische subtypes zijn astrocytomen, oligodendrogliomen en gemengde oligoastrocytomen. Kwaadaardige gliomen die WHO-klassen II tot IV omvatten, worden gekenmerkt door invasieve groei en recalcitrance voor de huidige therapieën. Elk jaar worden in de Verenigde....
1. Voorbereiding van tumorcelsuspensie
Opmerking: Voor het vaststellen en onderhouden van primaire orthotopische glioom xenograften zijn passende institutionele goedkeuringen voor het gebruik van patiëntenmateriaal en dieren vereist. In het Vanderbilt Universitair Medisch Centrum wordt gereseceerd tumormateriaal verzameld dat hoger is dan het materiaal dat nodig is voor diagnostische doeleinden, met toestemming van de patiënt voor een onderzoeksweefselopslagplaats. Specimens .......
Gedissocieerde glioomcellen worden rechtstreeks in de hersenen van immuungecompromitteerde muizen getransplanteerd om primaire orthotopische xenograftlijnen te verkrijgen. Elk tumormonster krijgt voorafgaand aan de transplantatie een gerandomiseerd nummer toegewezen, als onderdeel van het deidentificatieproces om beschermde gezondheidsinformatie te verwijderen. Hiervoor gebruiken we een 5-cijferig REDcap databasenummer. Figuur 1 illustreert het proces en de nomenclatuur voor het vaststellen van een xenog.......
Gekweekte cellijnen, xenografts en genetisch gemanipuleerde muizen zijn de meest voorkomende methoden voor het modelleren van gliomen, en er zijn verschillende voordelen en beperkingen voor elk modelsysteem3,13,14. Relevante voordelen van primaire orthotopische glioom xenograften zijn infiltratieve groei die diffuse gliomen typeert en het behoud van genetische veranderingen en belangrijke signaleringsmechanismen die buitengewoon moeilijk te onderhouden kunnen zijn in gekweekte glioomcellen. Bijvoorbeeld, i.......
We zijn vooral patiënten van het Vanderbilt Universitair Medisch Centrum die onschatbaar onderzoeksmateriaal leverden voor de Molecular Neurosurgical Tissue Bank, bijzonder veel tegoed. We danken degenen die de Tissue Bank hebben opgericht en onderhouden, Reid C. Thompson MD (hoofdonderzoeker), Cherryl Kinnard RN (onderzoeksverpleegkundige) en Larry A. Pierce MS (manager). Histologische diensten werden gedeeltelijk uitgevoerd door het Translational Pathology Shared Resource van het Vanderbilt Universitair Medisch Centrum (VUMC) (ondersteund door toekenning 5P30 CA068485 aan het Vanderbilt-Ingram Cancer Center). Dit werk werd ondersteund door subsidies aan MKC van het ....
Name | Company | Catalog Number | Comments |
Phosphate buffered saline |
Life Technologies |
14040-133 | |
Papain dissociation system |
Worthington Biochemical Corp. |
LK003150 | |
Trypan blue solution 0.4% |
Life Technologies |
15250061 | |
Ketamine HCl |
Obtained from institutional pharmacy or local veterinary supply company | ||
Xylazine HCl | |||
Ketoprofen | |||
Ophthalmic ointment | |||
Povidone-iodine |
Fisher Scientific |
190061617 | |
Cryopreservation medium and proliferation supplement |
StemCell Technologies |
05751 | |
0.2% Heparin sodium salt in PBS |
StemCell Technologies |
07980 | |
Penicillin-streptomycin |
Life Technologies |
15140-122 | |
Dimethyl sulfoxide |
Sigma-Aldrich |
D6250-5X10ML | |
NOD.Cg-Prkdcscid I/2rgtm1Wjl/SzJ mice |
The Jackson Laboratory |
005557 |
NSG mice |
Anti-human vimentin antibody |
Dako |
M7020 |
Use 1:200 to 1:800 |
Anti-human IDH1 R132H antibody |
Dianova |
DIA-H09 |
Use 1:100 to 1:400 |
Material |
Company |
Catalogue Number |
Comments |
Centrifuge with swinging bucket rotor | |||
Pipetter with dispensing speed control | |||
Disposable hemocytometer |
Fisher Scientific |
22-600-100 | |
Sterile surgical gloves |
Fisher Scientific |
11-388128 | |
Disposable gown |
Fisher Scientific |
18-567 | |
Surgical mask |
Fisher Scientific |
19-120-1256 | |
Tuberculin syringe |
BD |
305620 | |
Alcohol pads |
Fisher Scientific |
22-246-073 | |
Portable electronic scale |
Fisher Scientific |
01-919-33 | |
Zoom stereomicroscope | |||
Surgical clipper |
Stoelting |
51465 | |
Scalpel handle |
Fine Science Tools |
10003-12 | |
Scalpel blades, #10 | |||
Stereotaxic instrument |
Stoelting |
51730 | |
High-speed drill |
Stoelting |
51449 | |
Drill bit, 0.6 mm | Stoelting | 514552 | |
Hamilton syringe |
Hamilton |
80336 | |
Autoclip, 9 mm |
BD |
427630 | |
Circulating water warming pad |
Kent Scientific |
TP-700 TP-1215EA | |
Hot bead dry sterilizer |
Kent Scientific |
INS300850 | |
Surgical scissors |
Fine Science Tools |
14101-14 | |
Fine scissors |
Fine Science Tools |
14094-11 | |
Spring scissors |
Fine Science Tools |
15018-10 | |
Dumont forceps |
Fine Science Tools |
11251-30 | |
Semimicro spatulas |
Fisher Scientific |
14374 | |
Mouse brain slicer matrix |
Zivic Instruments |
BSMAS002-1 | |
Cryogenic storage vials |
Fisher Scientific |
12-567-501 |
ABOUT JoVE
Copyright © 2024 MyJoVE Corporation. All rights reserved