Summary
Abstract
Introduction
Protocol
Representative Results
Discussion
Acknowledgements
Materials
References
Medicine
Les gliomas malins constituent un groupe hétérogène de néoplasmes glial fortement infiltrative avec les configurations cliniques et moléculaires distinctes. Les xénogreffes orthotopic primaires récapitulent les dispositifs histopathologiques et moléculaires des sous-types malins de glioma dans les modèles animaux précliniques.
Les gliomas malins constituent un groupe hétérogène de néoplasmes glial fortement infiltrative avec les configurations cliniques et moléculaires distinctes. Les xénogreffes orthotopic primaires récapitulent les dispositifs histopathologiques et moléculaires des sous-types malins de glioma dans les modèles animaux précliniques. Pour modéliser les gliomes malins de grade III et IV de l’OMS dans les essais de transplantation, les cellules tumorales humaines sont xénogreffes dans un site orthotopique, le cerveau, de souris immunodéprimées. Contrairement aux xénogreffes secondaires qui utilisent les cellules cultivées de tumeur, des cellules humaines de glioma sont dissociées des spécimens réséqués et transplantées sans passage antérieur dans la culture de tissu pour générer les xénogreffes primaires. Le procédé dans ce rapport détaille la préparation d’échantillon de tumeur, la transplantation intra-crânienne chez les souris immunocompromised, la surveillance pour l’engraftment de tumeur et la récolte de tumeur pour le passage suivant dans les animaux réceptifs ou l’analyse. La préparation de cellules tumorales nécessite 2 heures et la procédure chirurgicale nécessite 20 min/animal.
Les gliomes malins sont des tumeurs gliales primaires du système nerveux central qui se produisent dans le cerveau et parfois dans la moelle épinière. Les gliomes sont classés par l’Organisation mondiale de la santé (OMS) en fonction de leur ressemblance histologique avec les astrocytes, les oligodendrocytes ou les cellules épendymaires, puis classés numériquement (I à IV) pour les caractéristiques pathologiques de la malignité. Les sous-types histologiques les plus communs sont les astrocytomas, les oligodendrogliomas et les oligoastrocytomas mélangés. Les gliomes malins englobant les grades II à IV de l’OMS sont caractérisés par une croissance et une récalcitrance i....
1. Préparation de la suspension de cellules tumorales
Remarque : Des approbations institutionnelles appropriées pour l’utilisation du matériel patient et des animaux sont requises pour établir et maintenir des xénogreffes orthotopiques primaires de gliome. Au Centre médical de l’Université Vanderbilt, le matériel tumoral réséqué qui est supérieur à celui requis à des fins diagnostiques est recueilli avec le consentement du patient pour un dépôt de tissus de .......
Les cellules de gliome dissociées sont transplantées directement dans le cerveau de souris immunodéprimées pour obtenir des lignées de xénogreffe orthotopiques primaires. Chaque échantillon tumoral se voit attribuer un numéro randomisé avant la transplantation, dans le cadre du processus de désidentification visant à supprimer les informations de santé protégées. Nous utilisons un numéro de base de données REDcap à 5 chiffres à cette fin. La figure 1 illustre le processus et la nomencla.......
Les lignées cellulaires cultivées, les xénogreffes et les souris génétiquement modifiées sont les méthodes les plus courantes de modélisation des gliomes, et il existe des avantages et des limites distincts pour chaque système modèle3,13,14. Les avantages pertinents des xénogreffes orthotopiques primaires de glioma incluent la croissance infiltrative qui caractérise des gliomas diffus et la conservation des changements génétiques et des mécanismes de signalisation importants qui peuvent être ex.......
Nous sommes particulièrement redevables aux patients du Centre médical de l’Université Vanderbilt qui ont fourni du matériel de recherche inestimable pour la Banque de tissus neurochirurgicaux moléculaires. Nous remercions ceux qui ont établi et maintenu la Banque de tissus, Reid C. Thompson MD (chercheur principal), Cherryl Kinnard INF (infirmière de recherche) et Larry A. Pierce MS (gestionnaire). Les services histologiques ont été effectués, en partie, par la ressource partagée en pathologie translationnelle du Centre médical de l’Université Vanderbilt (VUMC) (soutenue par le prix 5P30 CA068485 au Centre de cancérologie Vanderbilt-Ingram). Ce travail a été soutenu ....
Name | Company | Catalog Number | Comments |
Phosphate buffered saline |
Life Technologies |
14040-133 | |
Papain dissociation system |
Worthington Biochemical Corp. |
LK003150 | |
Trypan blue solution 0.4% |
Life Technologies |
15250061 | |
Ketamine HCl |
Obtained from institutional pharmacy or local veterinary supply company | ||
Xylazine HCl | |||
Ketoprofen | |||
Ophthalmic ointment | |||
Povidone-iodine |
Fisher Scientific |
190061617 | |
Cryopreservation medium and proliferation supplement |
StemCell Technologies |
05751 | |
0.2% Heparin sodium salt in PBS |
StemCell Technologies |
07980 | |
Penicillin-streptomycin |
Life Technologies |
15140-122 | |
Dimethyl sulfoxide |
Sigma-Aldrich |
D6250-5X10ML | |
NOD.Cg-Prkdcscid I/2rgtm1Wjl/SzJ mice |
The Jackson Laboratory |
005557 |
NSG mice |
Anti-human vimentin antibody |
Dako |
M7020 |
Use 1:200 to 1:800 |
Anti-human IDH1 R132H antibody |
Dianova |
DIA-H09 |
Use 1:100 to 1:400 |
Material |
Company |
Catalogue Number |
Comments |
Centrifuge with swinging bucket rotor | |||
Pipetter with dispensing speed control | |||
Disposable hemocytometer |
Fisher Scientific |
22-600-100 | |
Sterile surgical gloves |
Fisher Scientific |
11-388128 | |
Disposable gown |
Fisher Scientific |
18-567 | |
Surgical mask |
Fisher Scientific |
19-120-1256 | |
Tuberculin syringe |
BD |
305620 | |
Alcohol pads |
Fisher Scientific |
22-246-073 | |
Portable electronic scale |
Fisher Scientific |
01-919-33 | |
Zoom stereomicroscope | |||
Surgical clipper |
Stoelting |
51465 | |
Scalpel handle |
Fine Science Tools |
10003-12 | |
Scalpel blades, #10 | |||
Stereotaxic instrument |
Stoelting |
51730 | |
High-speed drill |
Stoelting |
51449 | |
Drill bit, 0.6 mm | Stoelting | 514552 | |
Hamilton syringe |
Hamilton |
80336 | |
Autoclip, 9 mm |
BD |
427630 | |
Circulating water warming pad |
Kent Scientific |
TP-700 TP-1215EA | |
Hot bead dry sterilizer |
Kent Scientific |
INS300850 | |
Surgical scissors |
Fine Science Tools |
14101-14 | |
Fine scissors |
Fine Science Tools |
14094-11 | |
Spring scissors |
Fine Science Tools |
15018-10 | |
Dumont forceps |
Fine Science Tools |
11251-30 | |
Semimicro spatulas |
Fisher Scientific |
14374 | |
Mouse brain slicer matrix |
Zivic Instruments |
BSMAS002-1 | |
Cryogenic storage vials |
Fisher Scientific |
12-567-501 |
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