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Acknowledgements
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Medicine
Maligne Gliome bilden eine heterogene Gruppe hochinfiltratischer gliaaler Neoplasmen mit ausgeprägten klinischen und molekularen Merkmalen. Primäre orthotopische Xenografts rekapitulieren die histopathologischen und molekularen Merkmale bösartiger Gliom-Subtypen in präklinischen Tiermodellen.
Maligne Gliome bilden eine heterogene Gruppe hochinfiltratischer gliaaler Neoplasmen mit ausgeprägten klinischen und molekularen Merkmalen. Primäre orthotopische Xenografts rekapitulieren die histopathologischen und molekularen Merkmale bösartiger Gliom-Subtypen in präklinischen Tiermodellen. Um die WHO-Grade III und IV maligne Gliome in Transplantationstests zu modellieren, werden menschliche Tumorzellen in eine orthotopische Stelle, das Gehirn, von immungeschwächten Mäusen xenografiert. Im Gegensatz zu sekundären Xenografts, die kultivierte Tumorzellen nutzen, werden menschliche Gliomzellen von resezierten Proben getrennt und ohne vorherige Passage in der Gewebekultur transplantiert, um primäre Xenografts zu erzeugen. Das Verfahren in diesem Bericht beschreibt die Tumorprobenvorbereitung, die intrakranielle Transplantation in immungeschwächte Mäuse, die Überwachung der Tumorenpfroptmentierung und die Tumorernte für den späteren Übergang in Empfängertiere oder die Analyse. Tumorzellpräparat erfordert 2 Stunden und chirurgische Eingriffe erfordern 20 min/Tier.
Bösartige Gliome sind primäre Gliatumoren des zentralen Nervensystems, die im Gehirn und gelegentlich im Rückenmark auftreten. Gliome werden von der Weltgesundheitsorganisation (WHO) nach histologischer Ähnlichkeit mit Astrozyten, Oligodendrozyten oder ependymalen Zellen klassifiziert und dann numerisch (I bis IV) für pathologische Merkmale der Malignität eingestuft. Die häufigsten histologischen Subtypen sind Astrozytome, Oligodendrogliome und gemischte Oligoastrozytome. Bösartige Gliome, die die KLASSEN II bis IV der WHO umfassen, zeichnen sich durch invasives Wachstum und Widerspenstigkeit gegenüber aktuellen Therapien aus. Jedes Jahr wird in den Vereinigten Staate....
1. Vorbereitung der Tumorzellsuspension
Hinweis: Für die Herstellung und Aufrechterhaltung von primären orthotopischen Gliom-Xenografts sind geeignete institutionelle Genehmigungen für die Verwendung von Patientenmaterial und Tieren erforderlich. Am Vanderbilt University Medical Center wird resektiertes Tumormaterial, das über dem für diagnostische Zwecke erforderlichen Material hinausgeht, mit Zustimmung des Patienten für ein Forschungsgewebe-Repository gesammelt. Die Pr.......
Dissoziierte Gliomzellen werden direkt in das Gehirn immungeschwächter Mäuse transplantiert, um primäre orthotopische Xenograft-Linien zu erhalten. Jeder Tumorprobe wird vor der Transplantation eine randomisierte Zahl zugewiesen, als Teil des Deidentifizierungsprozesses, um geschützte Gesundheitsinformationen zu entfernen. Dazu verwenden wir eine 5-stellige REDcap-Datenbanknummer. Abbildung 1 zeigt den Prozess und die Nomenklatur zur Herstellung einer Xenograft-Linie aus einem Glioblastom (GBM 17182).......
Kultivierte Zelllinien, Xenografts und gentechnisch veränderte Mäuse sind die gebräuchlichsten Methoden zur Modellierung von Gliomen, und es gibt deutliche Vorteile und Einschränkungen für jedes Modellsystem3,13,14. Relevante Vorteile von primären orthotopischen Gliom-Xeografts sind infiltratives Wachstum, das diffuse Gliome typisiert, und die Retention genetischer Veränderungen und wichtige Signalmechanismen, die in kultivierten Gliomzellen äußerst schwierig zu erhalten sein können. Zum Beispiel kö.......
Wir sind uns besonders bei Patienten am Vanderbilt University Medical Center zu zu sehr gedankt, die unschätzbares Forschungsmaterial für die Molecular Neurosurgical Tissue Bank zur Verfügung gestellt haben. Wir danken allen, die die Tissue Bank gegründet und unterhalten haben, Reid C. Thompson MD (Hauptermittler), Cherryl Kinnard RN (Forschungsschwester) und Larry A. Pierce MS (Manager). Histologische Dienstleistungen wurden teilweise vom Vanderbilt University Medical Center (VUMC) Translational Pathology Shared Resource (unterstützt durch die Auszeichnung 5P30 CA068485 an das Vanderbilt-Ingram Cancer Center) durchgeführt. Diese Arbeit wurde durch Zuschüsse an MKC au....
Name | Company | Catalog Number | Comments |
Phosphate buffered saline |
Life Technologies |
14040-133 | |
Papain dissociation system |
Worthington Biochemical Corp. |
LK003150 | |
Trypan blue solution 0.4% |
Life Technologies |
15250061 | |
Ketamine HCl |
Obtained from institutional pharmacy or local veterinary supply company | ||
Xylazine HCl | |||
Ketoprofen | |||
Ophthalmic ointment | |||
Povidone-iodine |
Fisher Scientific |
190061617 | |
Cryopreservation medium and proliferation supplement |
StemCell Technologies |
05751 | |
0.2% Heparin sodium salt in PBS |
StemCell Technologies |
07980 | |
Penicillin-streptomycin |
Life Technologies |
15140-122 | |
Dimethyl sulfoxide |
Sigma-Aldrich |
D6250-5X10ML | |
NOD.Cg-Prkdcscid I/2rgtm1Wjl/SzJ mice |
The Jackson Laboratory |
005557 |
NSG mice |
Anti-human vimentin antibody |
Dako |
M7020 |
Use 1:200 to 1:800 |
Anti-human IDH1 R132H antibody |
Dianova |
DIA-H09 |
Use 1:100 to 1:400 |
Material |
Company |
Catalogue Number |
Comments |
Centrifuge with swinging bucket rotor | |||
Pipetter with dispensing speed control | |||
Disposable hemocytometer |
Fisher Scientific |
22-600-100 | |
Sterile surgical gloves |
Fisher Scientific |
11-388128 | |
Disposable gown |
Fisher Scientific |
18-567 | |
Surgical mask |
Fisher Scientific |
19-120-1256 | |
Tuberculin syringe |
BD |
305620 | |
Alcohol pads |
Fisher Scientific |
22-246-073 | |
Portable electronic scale |
Fisher Scientific |
01-919-33 | |
Zoom stereomicroscope | |||
Surgical clipper |
Stoelting |
51465 | |
Scalpel handle |
Fine Science Tools |
10003-12 | |
Scalpel blades, #10 | |||
Stereotaxic instrument |
Stoelting |
51730 | |
High-speed drill |
Stoelting |
51449 | |
Drill bit, 0.6 mm | Stoelting | 514552 | |
Hamilton syringe |
Hamilton |
80336 | |
Autoclip, 9 mm |
BD |
427630 | |
Circulating water warming pad |
Kent Scientific |
TP-700 TP-1215EA | |
Hot bead dry sterilizer |
Kent Scientific |
INS300850 | |
Surgical scissors |
Fine Science Tools |
14101-14 | |
Fine scissors |
Fine Science Tools |
14094-11 | |
Spring scissors |
Fine Science Tools |
15018-10 | |
Dumont forceps |
Fine Science Tools |
11251-30 | |
Semimicro spatulas |
Fisher Scientific |
14374 | |
Mouse brain slicer matrix |
Zivic Instruments |
BSMAS002-1 | |
Cryogenic storage vials |
Fisher Scientific |
12-567-501 |
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