Summary
Abstract
Introduction
Protocol
Representative Results
Discussion
Acknowledgements
Materials
References
Medicine
Ondartede gliomer utgjør en heterogen gruppe svært infiltrative glial neoplasmer med distinkte kliniske og molekylære egenskaper. Primære ortotopiske fremmedegrafter rekapitulerer histopatologiske og molekylære egenskaper av ondartede gliomaundertyper i prekliniske dyremodeller.
Ondartede gliomer utgjør en heterogen gruppe svært infiltrative glial neoplasmer med distinkte kliniske og molekylære egenskaper. Primære ortotopiske fremmedegrafter rekapitulerer histopatologiske og molekylære egenskaper av ondartede gliomaundertyper i prekliniske dyremodeller. For å modellere WHO grader III og IV ondartede gliomer i transplantasjonsanalyser, blir humane tumorceller xenograftert til et ortotopisk sted, hjernen, av immunkompromitterte mus. I motsetning til sekundære xenografter som bruker dyrkede tumorceller, blir menneskelige gliomaceller dissosiert fra resekterte prøver og transplantert uten forutgående passasje i vevskultur for å generere primære xenografter. Prosedyren i denne rapporten beskriver tumorprøvepreparering, intrakraniell transplantasjon til immunkompromitterte mus, overvåking for tumor engraftment og tumorhøsting for etterfølgende passasje til mottakerdyr eller analyse. Tumorcellepreparat krever 2 timer og kirurgisk prosedyre krever 20 min / dyr.
Ondartede gliomer er primære glialtumorer i sentralnervesystemet som forekommer i hjernen og noen ganger ryggmargen. Gliomas er klassifisert av Verdens helseorganisasjon (WHO) i henhold til histologiske likheter med astrocytter, oligodendrocytter eller ependymale celler og deretter numerisk gradert (I til IV) for patologiske egenskaper av malignitet. De vanligste histologiske undertypene er astrocytomer, oligodendrogliomer og blandede oligoastrocytomer. Ondartede gliomer som omfatter WHO-karakterer II til IV er preget av invasiv vekst og tilbakevendende til dagens terapier. Hvert år i USA diagnostiseres ca. 15 750 personer med ondartet gliom og anslagsvis 12 740 pasie....
1. Forberedelse av tumorcellefjæring
Merk: Hensiktsmessige institusjonelle godkjenninger for bruk av pasientmateriale og dyr er nødvendig for å etablere og vedlikeholde primære ortotopiske glioma xenografter. Ved Vanderbilt University Medical Center samles resected tumormateriale som er i overkant av det som kreves for diagnostiske formål, med pasientsamtykke for et forskningsvevslager. Prøver er merket med et randomisert 5-sifret REDcap-databasenummer og alle pasientspes.......
Dissosierte gliomaceller transplanteres direkte inn i hjernen til immunkompromitterte mus for å oppnå primære ortotopiske xenograftlinjer. Hver tumorprøve tildeles et randomisert tall før transplantasjon, som en del av deidentifiseringsprosessen for å fjerne beskyttet helseinformasjon. Vi bruker et 5-sifret REDcap databasenummer til dette formålet. Figur 1 illustrerer prosessen og nomenklaturen for å etablere en xenograftlinje fra et glioblastom (GBM 17182) med isocitrate dehydrogenase 1 (IDH1) m.......
Kultiverte cellelinjer, xenografter og genmodifiserte mus er de vanligste metodene for modellering av gliomer, og det er klare fordeler og begrensninger for hvert modellsystem3,13,14. Relevante fordeler med primære ortotopiske glioma xenografts inkluderer infiltrativ vekst som typifies diffuse gliomer og oppbevaring av genetiske endringer og viktige signalmekanismer som kan være svært vanskelig å opprettholde i dyrkede gliomaceller. For eksempel kan jegsocitrate dehydrogenase mutasjoner og Sonic p.......
Vi står spesielt i gjeld til pasienter ved Vanderbilt University Medical Center som ga uvurderlig forskningsmateriale til Molecular Neurosurgical Tissue Bank. Vi takker de som etablerte og vedlikeholder Tissue Bank, Reid C. Thompson MD (prosjektleder), Cherryl Kinnard RN (forskningssykepleier) og Larry A. Pierce MS (leder). Histologiske tjenester ble delvis utført av Vanderbilt University Medical Center (VUMC) Translational Pathology Shared Resource (støttet av pris 5P30 CA068485 til Vanderbilt-Ingram Cancer Center). Dette arbeidet ble støttet av tilskudd til MKC fra NINDS (1R21NS070139), Burroughs Wellcome Fund og VMC utviklingsfond. MKC støttes av Institutt for vete....
Name | Company | Catalog Number | Comments |
Phosphate buffered saline |
Life Technologies |
14040-133 | |
Papain dissociation system |
Worthington Biochemical Corp. |
LK003150 | |
Trypan blue solution 0.4% |
Life Technologies |
15250061 | |
Ketamine HCl |
Obtained from institutional pharmacy or local veterinary supply company | ||
Xylazine HCl | |||
Ketoprofen | |||
Ophthalmic ointment | |||
Povidone-iodine |
Fisher Scientific |
190061617 | |
Cryopreservation medium and proliferation supplement |
StemCell Technologies |
05751 | |
0.2% Heparin sodium salt in PBS |
StemCell Technologies |
07980 | |
Penicillin-streptomycin |
Life Technologies |
15140-122 | |
Dimethyl sulfoxide |
Sigma-Aldrich |
D6250-5X10ML | |
NOD.Cg-Prkdcscid I/2rgtm1Wjl/SzJ mice |
The Jackson Laboratory |
005557 |
NSG mice |
Anti-human vimentin antibody |
Dako |
M7020 |
Use 1:200 to 1:800 |
Anti-human IDH1 R132H antibody |
Dianova |
DIA-H09 |
Use 1:100 to 1:400 |
Material |
Company |
Catalogue Number |
Comments |
Centrifuge with swinging bucket rotor | |||
Pipetter with dispensing speed control | |||
Disposable hemocytometer |
Fisher Scientific |
22-600-100 | |
Sterile surgical gloves |
Fisher Scientific |
11-388128 | |
Disposable gown |
Fisher Scientific |
18-567 | |
Surgical mask |
Fisher Scientific |
19-120-1256 | |
Tuberculin syringe |
BD |
305620 | |
Alcohol pads |
Fisher Scientific |
22-246-073 | |
Portable electronic scale |
Fisher Scientific |
01-919-33 | |
Zoom stereomicroscope | |||
Surgical clipper |
Stoelting |
51465 | |
Scalpel handle |
Fine Science Tools |
10003-12 | |
Scalpel blades, #10 | |||
Stereotaxic instrument |
Stoelting |
51730 | |
High-speed drill |
Stoelting |
51449 | |
Drill bit, 0.6 mm | Stoelting | 514552 | |
Hamilton syringe |
Hamilton |
80336 | |
Autoclip, 9 mm |
BD |
427630 | |
Circulating water warming pad |
Kent Scientific |
TP-700 TP-1215EA | |
Hot bead dry sterilizer |
Kent Scientific |
INS300850 | |
Surgical scissors |
Fine Science Tools |
14101-14 | |
Fine scissors |
Fine Science Tools |
14094-11 | |
Spring scissors |
Fine Science Tools |
15018-10 | |
Dumont forceps |
Fine Science Tools |
11251-30 | |
Semimicro spatulas |
Fisher Scientific |
14374 | |
Mouse brain slicer matrix |
Zivic Instruments |
BSMAS002-1 | |
Cryogenic storage vials |
Fisher Scientific |
12-567-501 |
ABOUT JoVE
Copyright © 2024 MyJoVE Corporation. All rights reserved