Summary
Abstract
Introduction
Protocol
Representative Results
Discussion
Acknowledgements
Materials
References
Medicine
Gliomas malignos constituem um grupo heterogêneo de neoplasias gliais altamente infiltrativas com características clínicas e moleculares distintas. Xenograftos ortotópicos primários recapitulam as características histopatológicas e moleculares de subtipos de glioma malignos em modelos animais pré-clínicos.
Gliomas malignos constituem um grupo heterogêneo de neoplasias gliais altamente infiltrativas com características clínicas e moleculares distintas. Xenograftos ortotópicos primários recapitulam as características histopatológicas e moleculares de subtipos de glioma malignos em modelos animais pré-clínicos. Para modelar gliomas malignos de grau III e IV em ensaios de transplante, as células tumorais humanas são xenoengrafadas em um sítio ortotópico, o cérebro, de camundongos imunocomprometidos. Em contraste com os xenoenxertos secundários que utilizam células tumorais cultivadas, as células de glioma humano são dissociadas de espécimes ressecados e transplantadas sem passagem prévia na cultura tecidual para gerar xenoenxertos primários. O procedimento deste relatório detalha a preparação da amostra de tumores, transplante intracraniano em camundongos imunocomprometidos, monitoramento de enenxerção tumoral e colheita de tumores para posterior passagem em animais receptores ou análise. A preparação das células tumorais requer 2 horas e o procedimento cirúrgico requer 20 minutos/animal.
Gliomas malignos são tumores gliais primários do sistema nervoso central que ocorrem no cérebro e ocasionalmente na medula espinhal. Os gliomas são classificados pela Organização Mundial da Saúde (OMS) de acordo com a semelhança histológica com astrócitos, oligodendrócitos ou células ependímicas e, em seguida, numericamente classificados (I a IV) para características patológicas da malignidade. Os subtipos histológicos mais comuns são astrocitomas, oligodendrogliomas e oligoastrocitomas mistos. Gliomas malignos que englobam os graus II a IV da OMS são caracterizados pelo crescimento invasivo e recalcitrância às terapias atuais. Todos os anos, nos Estados Unidos, cerca....
1. Preparação da suspensão das células tumorais
Nota: As aprovações institucionais adequadas para o uso de material do paciente e animais são necessárias para estabelecer e manter xenoenxertos ortotópicos primários de glioma. No Vanderbilt University Medical Center, o material tumoral ressecado que é superior ao necessário para fins diagnósticos é coletado com o consentimento do paciente para um repositório de tecido de pesquisa. As amostras são rotuladas com um.......
Células de glioma dissociadas são transplantadas diretamente no cérebro de camundongos imunocomprometidos para obter linhas ortotópicas primárias de xenoenxerto. Cada amostra tumoral recebe um número randomizado antes do transplante, como parte do processo de desidentificação para remover informações de saúde protegidas. Usamos um número de banco de dados REDcap de 5 dígitos para este fim. A Figura 1 ilustra o processo e a nomenclatura para estabelecer uma linha de xenoenxerto a partir de um.......
Linhas celulares cultivadas, xenoenxertos e camundongos geneticamente modificados são os métodos mais comuns para modelar gliomas, e há benefícios e limitações distintas para cada sistema modelo3,13,14. Os benefícios relevantes dos xenoenxertos ortotópicos primários incluem o crescimento infiltrado que tipifica gliomas difusos e a retenção de alterações genéticas e mecanismos de sinalização importantes que podem ser extremamente difíceis de manter em células de glioma cultivadas. Por exemplo,.......
Estamos particularmente endividados com pacientes do Centro Médico da Universidade vanderbilt que forneceram material de pesquisa inestimável para o Molecular Neurosurgical Tissue Bank. Agradecemos àqueles que estabeleceram e mantiveram o Banco de Tecidos, Reid C. Thompson MD (principal investigador), Cherryl Kinnard RN (enfermeira de pesquisa) e Larry A. Pierce MS (gerente). Os serviços histológicos foram realizados, em parte, pelo Recurso Compartilhado de Patologia Translacional (VUMC) do Vanderbilt University Medical Center (apoiado pelo prêmio 5P30 CA068485 ao Vanderbilt-Ingram Cancer Center). Este trabalho foi apoiado por subvenções ao MKC do NINDS (1R21NS070139)....
Name | Company | Catalog Number | Comments |
Phosphate buffered saline |
Life Technologies |
14040-133 | |
Papain dissociation system |
Worthington Biochemical Corp. |
LK003150 | |
Trypan blue solution 0.4% |
Life Technologies |
15250061 | |
Ketamine HCl |
Obtained from institutional pharmacy or local veterinary supply company | ||
Xylazine HCl | |||
Ketoprofen | |||
Ophthalmic ointment | |||
Povidone-iodine |
Fisher Scientific |
190061617 | |
Cryopreservation medium and proliferation supplement |
StemCell Technologies |
05751 | |
0.2% Heparin sodium salt in PBS |
StemCell Technologies |
07980 | |
Penicillin-streptomycin |
Life Technologies |
15140-122 | |
Dimethyl sulfoxide |
Sigma-Aldrich |
D6250-5X10ML | |
NOD.Cg-Prkdcscid I/2rgtm1Wjl/SzJ mice |
The Jackson Laboratory |
005557 |
NSG mice |
Anti-human vimentin antibody |
Dako |
M7020 |
Use 1:200 to 1:800 |
Anti-human IDH1 R132H antibody |
Dianova |
DIA-H09 |
Use 1:100 to 1:400 |
Material |
Company |
Catalogue Number |
Comments |
Centrifuge with swinging bucket rotor | |||
Pipetter with dispensing speed control | |||
Disposable hemocytometer |
Fisher Scientific |
22-600-100 | |
Sterile surgical gloves |
Fisher Scientific |
11-388128 | |
Disposable gown |
Fisher Scientific |
18-567 | |
Surgical mask |
Fisher Scientific |
19-120-1256 | |
Tuberculin syringe |
BD |
305620 | |
Alcohol pads |
Fisher Scientific |
22-246-073 | |
Portable electronic scale |
Fisher Scientific |
01-919-33 | |
Zoom stereomicroscope | |||
Surgical clipper |
Stoelting |
51465 | |
Scalpel handle |
Fine Science Tools |
10003-12 | |
Scalpel blades, #10 | |||
Stereotaxic instrument |
Stoelting |
51730 | |
High-speed drill |
Stoelting |
51449 | |
Drill bit, 0.6 mm | Stoelting | 514552 | |
Hamilton syringe |
Hamilton |
80336 | |
Autoclip, 9 mm |
BD |
427630 | |
Circulating water warming pad |
Kent Scientific |
TP-700 TP-1215EA | |
Hot bead dry sterilizer |
Kent Scientific |
INS300850 | |
Surgical scissors |
Fine Science Tools |
14101-14 | |
Fine scissors |
Fine Science Tools |
14094-11 | |
Spring scissors |
Fine Science Tools |
15018-10 | |
Dumont forceps |
Fine Science Tools |
11251-30 | |
Semimicro spatulas |
Fisher Scientific |
14374 | |
Mouse brain slicer matrix |
Zivic Instruments |
BSMAS002-1 | |
Cryogenic storage vials |
Fisher Scientific |
12-567-501 |
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