من السهل قياس إنتشار معاملات EGFP الموسومة البروتينات عن طريق غشاء البلازما ك الفضاء صورة الارتباط الطيفي

وينظم انتشار الأفقي وتجزئة بروتينات غشاء البلازما بإحكام في الخلايا، وبالتالي، ودراسة هذه العمليات سوف تكشف عن رؤى جديدة لغشاء البلازما وظيفة البروتين والتنظيم. مؤخرا، ك الفضاء صورة الارتباط الطيفي (KICS) وقد وضعت ¹ لتمكين القياسات الروتينية للمعاملات نشرها مباشرة من صور الموسومة fluorescently البروتينات غشاء البلازما، التي تجنب التحيز المنهجي الذي عرضته photophysics التحقيق. على الرغم من أن الأساس النظري لتحليل معقد، وطريقة يمكن تنفيذها من قبل nonexperts باستخدام رمز متاحة بحرية لقياس معاملات نشر من البروتينات. KICS بحساب دالة الارتباط الوقت من صورة كومة مضان المجهري بعد فورييه تحويل كل صورة إلى المتبادلة (ك) الفضاء. في وقت لاحق، في المتوسط ​​دائرية، اللوغاريتم الطبيعي وتحويل الخطية يناسب إلى وظيفة ارتباط تعطي معامل الانتشار. هذاوتوفر ورقة دليل خطوة بخطوة لتحليل الصورة وقياس معاملات الانتشار عبر KICS.

أولا، يتم الحصول على ارتفاع معدل الإطار تسلسل الصور من البلازما بروتين الغشاء fluorescently المسمى باستخدام المجهر مضان. ثم، يتم تحديد المنطقة ذات الاهتمام (ROI) تجنب عضيات داخل الخلايا، والانتقال حويصلات أو جاحظ مناطق الغشاء. يتم استيراد المكدس العائد على الاستثمار في مدونة متاحة بحرية ويتم تعيين العديد من المعلمات تحديدا (انظر القسم الطريقة) لتحليل KICS. البرنامج ثم يقوم بإنشاء "المنحدر من المنحدرات" مؤامرة من وظائف الارتباط الوقت ك الفضاء، ويتم حساب معامل الانتشار من المنحدر من المؤامرة. وفيما يلي الإجراء خطوة بخطوة KICS لقياس معامل الانتشار من بروتين الغشاء باستخدام الكلوي قناة المياه aquaporin-3 المفتاحية EGFP كمثال الكنسي.