कश्मीर अंतरिक्ष छवि सहसंबंध स्पेक्ट्रोस्कोपी का उपयोग EGFP टैग प्लाज्मा झिल्ली प्रोटीन का प्रसार गुणांक की आसान माप

पार्श्व प्रसार और प्लाज्मा झिल्ली प्रोटीन की compartmentalization कसकर कोशिकाओं में विनियमित रहे हैं और इस प्रकार, इन प्रक्रियाओं का अध्ययन प्लाज्मा झिल्ली प्रोटीन समारोह और विनियमन के लिए नए अंतर्दृष्टि खोलेगा. हाल ही में, कश्मीर अंतरिक्ष छवि सहसंबंध स्पेक्ट्रोस्कोपी (kICS) ¹ सीधे जांच Photophysics द्वारा शुरू की व्यवस्थित पूर्वाग्रहों से बचा कि fluorescently टैग प्लाज्मा झिल्ली प्रोटीन की छवियों, से प्रसार गुणांक की दिनचर्या माप सक्षम करने के लिए विकसित किया गया था. विश्लेषण के लिए सैद्धांतिक आधार जटिल है हालांकि, विधि प्रोटीन का प्रसार गुणांक को मापने के लिए एक स्वतंत्र रूप से उपलब्ध कोड का उपयोग कर nonexperts द्वारा कार्यान्वित किया जा सकता है. kICS पारस्परिक (कश्मीर) अंतरिक्ष करने के लिए प्रत्येक छवि के फूरियर परिवर्तन के बाद एक प्रतिदीप्ति माइक्रोस्कोपी छवि ढेर से एक समय सहसंबंध समारोह गणना करता है. बाद में, परिपत्र औसतन, प्राकृतिक लघुगणक बदलने और रैखिक पैदावार सहसंबंध समारोह के लिए प्रसार गुणांक फिट बैठता है. यहकागज kICS के माध्यम से छवि विश्लेषण और प्रसार गुणांक की माप के लिए एक कदम दर कदम मार्गदर्शन प्रदान करता है.

सबसे पहले, एक fluorescently लेबल प्लाज्मा झिल्ली प्रोटीन का एक उच्च फ्रेम दर छवि अनुक्रम एक प्रतिदीप्ति माइक्रोस्कोप का उपयोग अधिग्रहण कर लिया है. फिर, ब्याज (आरओआई) झिल्ली क्षेत्रों, intracellular organelles परहेज पुटिका चलती है या फैला हुआ की एक क्षेत्र का चयन किया है. आरओआई ढेर एक स्वतंत्र रूप से उपलब्ध कोड में आयात किया जाता है और कई परिभाषित मापदंडों (विधि अनुभाग देखें) kICS विश्लेषण के लिए सेट कर रहे हैं. कार्यक्रम तो कश्मीर अंतरिक्ष समय सहसंबंध कार्यों से साजिश एक "ढलान की ढलान" उत्पन्न करता है, और प्रसार गुणांक भूखंड की ढलान से गणना की है. नीचे एक विहित उदाहरण के रूप में EGFP के साथ टैग गुर्दे पानी चैनल aquaporin-3 का उपयोग कर एक झिल्ली प्रोटीन के गुणांक प्रसार को मापने के लिए एक कदम दर कदम kICS प्रक्रिया है.