Summary
Abstract
Introduction
Protocol
Representative Results
Discussion
Acknowledgements
Materials
References
Immunology and Infection
Described herein is a protocol to isolate and analyze the infiltrating leukocytes of tissues at the maternal-fetal interface (uterus, decidua, and placenta) of mice. This protocol maintains the integrity of most cell surface markers and yields enough viable cells for downstream applications including flow cytometry analysis.
التسامح المناعي في الحمل يتطلب أن النظام المناعي للأم يخضع لتغيرات مميزة من أجل قبول ورعاية الجنين. يبدأ هذا التسامح أثناء الجماع، أنشأ خلال تلقيح والزرع، وحافظت طوال فترة الحمل. يتم إثراء وسطاء الخلوية والجزيئية النشطة التسامح الأم والجنين في موقع التماس بين أنسجة الجنين والأم، والمعروفة باسم واجهة الأم والجنين، والذي يتضمن المشيمة والرحم والأنسجة الساقطية. وتتألف هذه الواجهة من خلايا انسجة والكريات البيض التسلل، ووفرة والمظهرية خصائصها تتغير على مدى فترة الحمل. وتشمل التسلل الكريات البيض في واجهة الأم والجنين العدلات، الضامة، والخلايا الجذعية، الخلايا البدينة، وخلايا T والخلايا B والخلايا القاتلة الطبيعية، والخلايا NKT التي تخلق معا المحلية الصغيرة للبيئة التي تحافظ على الحمل. اختلال التوازن بين هذه الخلايا أو أي inappropيعتبر تغيير riate في الظواهر التي آلية المرض في فترة الحمل. ولذلك، فإن دراسة الكريات البيض التي تتسلل إلى واجهة الأم والجنين أمر ضروري من أجل توضيح الآليات المناعية التي تؤدي إلى مضاعفات متعلقة بالحمل. الموصوفة هنا هو البروتوكول الذي يستخدم مزيجا من التفكك الميكانيكية لطيف تليها تصنيف الأنزيمية قوية مع بروتين وحال للكولاجين كوكتيل الأنزيمية لعزل الكريات البيض التسلل من أنسجة الفئران في واجهة الأم والجنين. هذا البروتوكول يسمح لعزل أعداد كبيرة من الكريات البيض قادرة على البقاء (> 70٪) مع خصائص المستضدات وظيفية الحفظ بما فيه الكفاية. ومن ثم يمكن تحليلها الكريات البيض معزولة من قبل العديد من التقنيات، بما في ذلك المناعي، فرز الخلايا، والتصوير، immunoblotting، مرنا التعبير، زراعة الخلايا، وفحوصات في المختبر وظيفية مثل ردود فعل متباينة الكريات البيض، والانتشار، أو فحوصات السمية الخلوية.
التسامح المناعي في الحمل هي فترة عندما تحدث تغيرات مميزة في الجهاز المناعي للأم. هذه التغييرات تسمح الأم لتحمل الجنين، والكسب غير المشروع شبه الصنعية 1. الجنين يعبر عن الأب معقد التوافق النسيجي الرئيسي (MHC) المستضدات 2، وقد تم العثور على خلايا الجنين في الدورة الدموية للأم 3. ومع ذلك، لا يتم رفض الجنين 4،5. ليست مفهومة تماما هذا اللغز.
تنص الفرضية الأخيرة أن التسامح الأم والجنين يتم إنشاؤه أثناء الجماع وتلقيح 6،7 وصيانتها للحفاظ على الحمل فترة ولاية كاملة 10/08. ويعتبر توزيع لهذا التسامح الأم و....
قبل العمل مع العينات المشار إليها في هذا البروتوكول، ويجب أن تعطى الموافقة الأخلاقية الحيوانية من خلال لجنة أخلاقيات البحوث المحلية ومجالس المراجعة المؤسسية. عند العمل مع دم الحيوانات والخلايا، أو العوامل الخطرة كما ذكر في هذا البروتوكول، يجب أن يتبع الإجراءات الم.......
يظهر تشريح الأنسجة الفئران من واجهة الأم والجنين في الشكل 1؛ ويشمل هذا الإجراء فتح التجويف البريتوني (الشكل 1A، B)، وأبواق الرحم (الشكل 1C) بما في ذلك مواقع زرع (الشكل 1D)، وجمع من أنسجة الرحم (الشكل 1E)، المشيمة (الشكل 1F)،
جمع البيانات متسقة أن يسجل وفرة والمظهرية خصائص الكريات البيض التسلل في واجهة الأم والجنين ضروري لفهم التسبب في مضاعفات مرتبطة بالحمل. وقد وصفت العديد من التقنيات التي تسهل عزل التسلل الكريات البيض من أنسجة الفئران في واجهة الأم والجنين طوال فترة الحمل 31،38،39،43-46........
وأيد NGL من قبل مبادرة جامعة واين ستيت في فترة ما حول الولادة صحة الأم وفترة ما حول الولادة وصحة الطفل. نحن نعترف بامتنان مورين McGerty وايمي E. Furcron (جامعة ولاية واين) لقراءة نقدية لها من المخطوطة.
....Name | Company | Catalog Number | Comments |
Magentic Cell Separation | |||
MS Columns | |||
Cell Separator | |||
30μm pre separation filters | |||
Multistand | |||
15mL safe lock conical tubes | |||
MACS Buffer | (0.5% bovine serum albumin, 2mM EDTA and 1X PBS) | ||
Reagents | |||
Anti-mouse CD16/CD32 | |||
Anti-mouse extracellular antibodies | (Table 1) | ||
Sodium azide | |||
Bovine serum albumin | (BSA) | ||
LIVE/DEAD viability dye | |||
Fixation buffer solution | |||
FACS Buffer | (1% bovine serum albumin, 0.5% sodium azide, and 1X PBS ph 7.2) | ||
Trypan Blue Solution 0.4% | |||
Fetal bovine serum | |||
Additional Instruments | |||
Incubator with shaker | |||
Flow cytometer | |||
Centrifuge | |||
Vacuum system | |||
Incubator | |||
Water bath | |||
Cell counter | |||
Microscope |
Tags
ABOUT JoVE
Copyright © 2024 MyJoVE Corporation. All rights reserved