从小鼠组织在母胎界面分离白细胞

Described herein is a protocol to isolate and analyze the infiltrating leukocytes of tissues at the maternal-fetal interface (uterus, decidua, and placenta) of mice. This protocol maintains the integrity of most cell surface markers and yields enough viable cells for downstream applications including flow cytometry analysis.

免疫耐受妊娠需要母亲的免疫系统发生，以接受和培养胎儿发育截然不同的变化。性交过程中启动了这种宽容，受精和着床过程中建立和维护整个孕期。母胎耐受性活跃的细胞和分子介质富集在胎儿与母体组织，被称为母胎界面，其中包括胎盘与子宫及蜕膜组织之间的接触部位。这个接口是由间质细胞和浸润白细胞，和它们的丰度和表型特征在怀孕过程中发生变化。白细胞浸润在母胎界面包括嗜中性粒细胞，巨噬细胞，树突细胞，肥大细胞，T细胞，B细胞，NK细胞，和NKT细胞一起创建的局部微环境，维持妊娠。这些细胞或任何inapprop之间的不平衡riate改变其表型被认为是疾病的妊娠的机制。因此，渗透到母胎界面白细胞的研究，以阐明导致妊娠并发症的免疫机制至关重要。本文中所描述的是，采用温和机械解离，随后通过一个健壮酶促解聚用蛋白分解和溶胶原酶鸡尾酒隔离从鼠组织中的白细胞浸润在母胎界面的组合的协议。该协议允许对高数量可行白细胞（> 70％）以足够保守抗原性和功能特性的分离。孤立白细胞然后可通过多种技术，包括免疫，细胞分选，成像，免疫印迹，mRNA的表达，细胞培养，并在体外功能测定法如混合白细胞反应，增殖或细胞毒性测定法来分析。

免疫耐受怀孕是一段当母亲的免疫系统内发生截然不同的变化。这些变化让母亲忍受了胎儿，一个半同种异体移植物^1。胎儿的父亲表示主要组织相容性复合体（MHC）抗原^2，和胎儿细胞已经在母体循环³被发现;然而，胎儿不被拒绝^4,5。这个谜尚不完全清楚。

最新的假说认为，母胎耐受性性交过程中创建和受精^6,7和维护，以维持一个足月妊娠^8-10。这母胎耐受的细目怀孕期间的^10-16早期和晚期疾病视为一种机制。母胎容忍包括各种白细胞亚种群，包括T细胞（调节性T细胞，Th1细胞，Th2细胞，和Th17细胞），MAC的参与噬细胞，嗜中性粒细胞，肥大细胞，NK细胞和NKT细胞，树突细胞，和B细胞，在密度和本地化这种变化在整个孕期^15,17-19。母胎耐受富集在母胎界面²⁰ -解剖位置在哪里，母亲的免疫系统与胎儿抗原相互作用^20,21。

母胎界面胎盘期间，当胎儿绒毛外滋养细胞侵入子宫粘膜^22-24创建。在该接口的胎侧，围绕胎儿膜创建一个专门的上皮表面的胎盘内，并且合体细胞控制与母体血液²²通过其直接接触的物质交换。在界面的母体侧，蜕膜募集在小鼠占30％至所有蜕膜细胞的50％的白细胞的异质池。....

与之前在此协议中提到的样品工作，动物伦理委员会批准，必须由当地研究伦理委员会和机构审查委员会给出。当与动物血，细胞，或如本协议的有害因素的工作，适当的生物安全和实验室安全的行动必须遵循的。

1.鼠标操作和组织收集

1. 准备一个无菌工作站，并获得无菌工具组织收集。这些工具将包括大型和小型手术剪，钳，细尖镊子。包括标记有相应的组织名称小?.......

从母胎界面小鼠组织的解剖示于图1;此过程包括打开腹膜腔（ 图1A，B），子宫角（ 图1C），包括植入位置（ 图1D），和子宫组织的集合（ 图1E），胎盘（ 图1F）和蜕膜（ 图1G），在16.5 DPC。 图2示出了分离的巨噬细胞的形态（F4 / 80 +）的蜕膜和子宫组织在16.5 DPC使用磁性细胞分选收集的。孤立的巨.......

它记录白细胞浸润的数量和表型特征在母胎界面一致的数据收集是必不可少的理解妊娠并发症的发病机制。几种技术已经描述了促进浸润从在母胎界面的鼠组织白细胞整个怀孕^{31,38,39,43-46}的分离。然而，每种技术不同的是，使用不同的酶或酶组合，需要不同的解离时间，不指定组织的数量时，以及最重要的是，并不总是指定分离的细胞的生存能力。本文所描述的协议允许渗透从鼠组织白细.......

NGL是由产妇，围产期和儿童健康的韦恩州立大学围产期倡议的支持。我们非常感谢莫林McGerty和Amy E. Furcron（韦恩州立大学），他们的手稿的读数。