Summary
Abstract
Introduction
Protocol
Representative Results
Discussion
Acknowledgements
Materials
References
Immunology and Infection
Described herein is a protocol to isolate and analyze the infiltrating leukocytes of tissues at the maternal-fetal interface (uterus, decidua, and placenta) of mice. This protocol maintains the integrity of most cell surface markers and yields enough viable cells for downstream applications including flow cytometry analysis.
गर्भावस्था में प्रतिरक्षा सहिष्णुता माँ की प्रतिरक्षा प्रणाली को विकसित भ्रूण को स्वीकार करने और पोषण करने के क्रम में विशिष्ट परिवर्तन की प्रक्रिया की आवश्यकता है। यह सहिष्णुता, सहवास के दौरान शुरू की गर्भाधान और आरोपण के दौरान स्थापित किया गया है, और गर्भावस्था के दौरान बनाए रखा है। मातृ-भ्रूण सहिष्णुता की सक्रिय सेलुलर और आणविक मध्यस्थों नाल और गर्भाशय और decidual ऊतकों भी शामिल है जो मातृ-भ्रूण इंटरफेस है, के रूप में जाना भ्रूण और मातृ ऊतकों के बीच संपर्क के स्थल पर समृद्ध कर रहे हैं। इस इंटरफ़ेस stromal कोशिकाओं और घुसपैठ leukocytes के शामिल है, और उनके बहुतायत और प्ररूपी विशेषताओं गर्भावस्था के दौरान अधिक से बदल जाते हैं। मातृ-भ्रूण इंटरफेस में घुसपैठ ल्यूकोसाइट्स एक साथ गर्भावस्था को बनाए कि स्थानीय माइक्रो माहौल बनाने कि न्यूट्रोफिल, मैक्रोफेज, वृक्ष के समान कोशिकाओं, मस्तूल कोशिकाओं, टी कोशिकाओं, बी कोशिकाओं, एन.के. कोशिकाओं, और NKT कोशिकाओं में शामिल हैं। इन कोशिकाओं को या किसी भी inapprop के बीच एक असंतुलनउनके phenotypes में riate परिवर्तन गर्भावस्था में इस रोग का एक तंत्र माना जाता है। इसलिए, मातृ-भ्रूण इंटरफ़ेस घुसपैठ कि leukocytes के अध्ययन गर्भावस्था संबंधी जटिलताओं को जन्म दे कि प्रतिरक्षा तंत्र को स्पष्ट करने के क्रम में आवश्यक है। इस के साथ साथ वर्णित प्रोटियोलिटिक और मातृ-भ्रूण इंटरफेस में murine ऊतकों से घुसपैठ ल्यूकोसाइट्स अलग करने के लिए collagenolytic एंजाइमी कॉकटेल के साथ एक मजबूत एंजाइमी disaggregation द्वारा पीछा कोमल यांत्रिक हदबंदी का एक संयोजन का उपयोग करता है कि एक प्रोटोकॉल है। इस प्रोटोकॉल पर्याप्त संरक्षित प्रतिजनी और कार्यात्मक गुणों के साथ व्यवहार्य ल्यूकोसाइट्स (> 70%) की उच्च संख्या के अलगाव के लिए अनुमति देता है। पृथक ल्यूकोसाइट्स तो immunophenotyping, सेल छँटाई, इमेजिंग, immunoblotting, mRNA अभिव्यक्ति, सेल संस्कृति, और इस तरह के मिश्रित ल्युकोसैट प्रतिक्रियाओं, प्रसार, या cytotoxicity assays के रूप में इन विट्रो कार्यात्मक assays में सहित कई तकनीकों, द्वारा विश्लेषण किया जा सकता है।
विशिष्ट परिवर्तन मां की प्रतिरक्षा प्रणाली के भीतर होते हैं जब गर्भावस्था में प्रतिरक्षा सहिष्णुता एक अवधि है। ये परिवर्तन मां भ्रूण, एक अर्द्ध allogenic भ्रष्टाचार 1 को सहन करने की अनुमति देते हैं। भ्रूण पैतृक प्रमुख उतक अनुरूपता जटिल (MHC) 2 एंटीजन, और भ्रूण कोशिकाओं मातृ परिसंचरण 3 में पाया गया है व्यक्त करता है; हालांकि, भ्रूण 4,5 अस्वीकार नहीं है। इस पहेली को पूरी तरह से समझ नहीं है।
सबसे हाल ही में परिकल्पना मातृ-भ्रूण सहिष्णुता सहवास के दौरान बनाया और 6,7 गर्भाधान और एक पूर्ण अवधि गर्भावस्था 8-10 बनाए रखने के लिए बनाए रखा है जो बताता है। इस मातृ-भ्रूण सहिष्णुता के टू....
इस प्रोटोकॉल में उल्लेख किया नमूनों के साथ काम करने से पहले, पशु नैतिक अनुमोदन स्थानीय अनुसंधान आचार समिति और संस्थागत समीक्षा बोर्ड द्वारा दी जानी चाहिए। पशु रक्त, सेल, या इस प्रोटोकॉल में वर्णित के र.......
मातृ-भ्रूण इंटरफेस में घुसपैठ leukocytes की बहुतायत और प्ररूपी विशेषताओं है कि रिकॉर्ड संगत डेटा के संग्रह गर्भावस्था संबंधी जटिलताओं के रोगजनन को समझने के लिए आवश्यक है। कई तकनीकों गर्भावस्था 31,38,39,43-46 भ?.......
एनजीएल मातृ, प्रसवकालीन और बाल स्वास्थ्य में वेन स्टेट यूनिवर्सिटी प्रसवकालीन इनीशिएटिव द्वारा समर्थित किया गया। हम कृतज्ञता पांडुलिपि के अपने महत्वपूर्ण पढ़ने के लिए मॉरीन McGerty और एमी ई Furcron (वेन स्टेट यूनिवर्सिटी) स्वीकार करते हैं।
....Name | Company | Catalog Number | Comments |
Magentic Cell Separation | |||
MS Columns | |||
Cell Separator | |||
30μm pre separation filters | |||
Multistand | |||
15mL safe lock conical tubes | |||
MACS Buffer | (0.5% bovine serum albumin, 2mM EDTA and 1X PBS) | ||
Reagents | |||
Anti-mouse CD16/CD32 | |||
Anti-mouse extracellular antibodies | (Table 1) | ||
Sodium azide | |||
Bovine serum albumin | (BSA) | ||
LIVE/DEAD viability dye | |||
Fixation buffer solution | |||
FACS Buffer | (1% bovine serum albumin, 0.5% sodium azide, and 1X PBS ph 7.2) | ||
Trypan Blue Solution 0.4% | |||
Fetal bovine serum | |||
Additional Instruments | |||
Incubator with shaker | |||
Flow cytometer | |||
Centrifuge | |||
Vacuum system | |||
Incubator | |||
Water bath | |||
Cell counter | |||
Microscope |
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