Выделение лейкоцитов из мышиного тканей на матери и плода интерфейс

Described herein is a protocol to isolate and analyze the infiltrating leukocytes of tissues at the maternal-fetal interface (uterus, decidua, and placenta) of mice. This protocol maintains the integrity of most cell surface markers and yields enough viable cells for downstream applications including flow cytometry analysis.

Иммунная толерантность во время беременности требует, чтобы иммунная система матери претерпевает изменения отличительные для того, чтобы принимать и лелеять развивающегося плода. Эта терпимость начинается при половом акте, созданы во оплодотворения и имплантации, и поддерживается на протяжении всей беременности. Активные клеточные и молекулярные медиаторы толерантности материнской плода обогащены в месте контакта между плода и материнской тканей, известных как материнской плода интерфейс, который включает в себя плаценту и матки и децидуальной ткани. Этот интерфейс состоит из стромальных клеток и инфильтрацией лейкоцитов, и их обилие и фенотипические характеристики меняются в течение беременности. Лейкоциты проникают в интерфейсе материнской плода включают нейтрофилы, макрофаги, дендритные клетки, тучные клетки, Т-клетки, В-клетки, NK-клетки и NKT клетки, которые вместе создают локальную микросреду, которая поддерживает беременность. Дисбаланс между этими клетками или любой inappropетел изменение в их фенотипов считается механизм болезни во время беременности. Таким образом, исследование лейкоцитов, которые проникают интерфейс материнской плода необходимо для того, чтобы выяснить иммунных механизмов, которые приводят к осложнениям, связанных с беременностью. Описанный здесь протокол, который использует комбинацию нежной механической диссоциации с последующим надежной ферментативной дезагрегации с протеолитической и коллагенолитического ферментативной коктейль, чтобы изолировать Лейкоциты проникают из мышиных тканей на границе материнской плода. Этот протокол позволяет изоляции высокой численности жизнеспособных лейкоцитов (> 70%) с достаточно консервативными антигенных и функциональные свойства. Изолированные лейкоциты могут быть проанализированы с помощью нескольких методов, в том числе иммунофенотипирования, сортировки клеток, изображений, иммуноблотинга, экспрессии мРНК, клеточной культуры, и в пробирке функциональных анализов, таких как смешанные реакции лейкоцитов, пролиферации, или цитотоксичности.

Иммунная толерантность во время беременности период, когда отличительные изменения происходят в иммунной системе матери. Эти изменения позволяют мать терпеть плод, полу-аллогенную трансплантата ^1. Плод выражает отцовской главного комплекса гистосовместимости (МНС) антигены ² и фетальные клетки были обнаружены в материнском кровотоке ^3; Однако, плод не отторгается ^4,5. Это загадка полностью не поняты.

Самая недавняя гипотеза утверждает, что толерантность материнского плода создается во время полового акта и оплодотворения ^6,7 и поддерживается выдержать полный срок беременности ^8-1....

Перед началом работы с образцами, указанных в этом протоколе, животное этическое одобрение должно быть дано комитетом по этике местного научно-исследовательского и организационного обзора советов по. При работе с кровью животных, клетки, или опасных веществ, упомянутые в настоящем пр?.......

Рассечение тканей мышиных из интерфейса материнской плода показано на рисунке 1; эта процедура включает в себя открытие в брюшную полость (рис 1а, б), рога матки (рис 1в) в том числе мест имплантации (рис 1D) и сбор маточных тканей (рис 1E), плацент?.......

Коллекция согласованных данных, которая записывает обилие и фенотипические характеристики Лейкоциты проникают в интерфейсе материнской плода имеет важное значение для понимания патогенеза осложнений, связанных с беременностью. Несколько методов было описано, что облегчать отделен.......

ШФЛУ при поддержке университета перинатального инициативы Wayne State в материнской, перинатальной и детского здоровья. Мы выражаем глубокую признательность Морин McGerty и Эми Е. Furcron (Wayne State University) за их критическое прочтение рукописи.