Immunofluorescence de suivi de l'absorption cellulaire de la lactoferrine humaine et de son activité associée antivirale contre le virus de l'hépatite C

The human lactoferrin (hLF) is a component of the immune system. In this study, immunofluorescence assays are used to demonstrate both the hepatocellular uptake of hLF and a qualitative reduction in the hepatitis C virus replication upon treatment with hLF.

L'immunofluorescence est une technique de laboratoire couramment utilisés pour étudier de nombreux aspects de la biologie. Il est généralement utilisé pour visualiser la distribution et / ou la localisation d'une molécule cible dans des cellules et des tissus. Immunofluorescence repose sur la spécificité des anticorps marqués par fluorescence contre leurs antigènes correspondants au sein d'une cellule. Les deux approches directes et indirectes immunofluorescence peuvent être utilisés qui reposent sur l'utilisation d'anticorps liés à un fluorochrome. L'immunofluorescence directe est moins fréquemment utilisé, car il fournit le signal inférieur, implique un coût plus élevé et moins de flexibilité. En revanche, l'immunofluorescence indirecte est plus couramment utilisé en raison de sa haute sensibilité et fournit un signal amplifié depuis plus d'un anticorps secondaire peut se rattacher à chaque anticorps primaire. Dans ce manuscrit, à la fois microscopie à épifluorescence et microscopie confocale ont été utilisés pour contrôler l'internalisation de la lactoferrine humaine, un élément important de la réponse immunitairesystème, dans les cellules hépatiques. De plus, nous avons surveillé le potentiel d'inhibition de la hLF sur la réplication intracellulaire du virus de l'hépatite C par immunofluorescence. Aussi bien les avantages et les inconvénients associés à ces approches sont discutées.

Immunofluorescence is a technique that uses a fluorescence microscope to visualize the distribution and/or localization of a target molecule in a biological sample. Immunofluorescence relies on the specificity of fluorescent-labelled antibodies against their corresponding antigens within a cell¹. It is typically used on tissue sections and cultured cell lines in order to analyze the distribution/localization of various biological molecules such as proteins, nucleic acids and glycans. It should be noted that immunofluorescence is often used in combination with other non-antibody methods of fluorescent staining such as the 4',6-diamidino-2-phenylindole (DAPI)....

1. Les cellules élaboration et au traitement

1. Dans une plaque de 24 puits, mettre un couvercle de verre au fond des puits. Laver chaque puits avec une solution saline tamponnée au phosphate (PBS).
2. Semences Huh-7 cellules de soutien réplicon sub-génomique du VHC dans chaque puits à une densité de 5 x 10 ⁴ cellules / puits. En l'absence de traitement à faire, les cellules peuvent être ensemencées à une densité plus élevée. Le milieu de culture est du milieu Eagle modifié de.......

La capacité de la lignée de cellules Huh-7 hépatique administrée de manière exogène à internaliser hLF a été surveillée en utilisant une immunofluorescence sur Miscroscope confocale. hLF a été ajouté au milieu de culture et l'internalisation a été laissé pendant 24 heures, après quoi, la hLF extracellulaire a été lavée avec du PBS et la membrane résiduel lié hLF a été dégradé avec un traitement à la trypsine 5 min (1 ml). Les cellules ont été réensemencées et autorisés à ré-adhérer.......

L'épidémie de VHC demeure une menace mondiale, avec 80% des patients nouvellement infectés en développement une infection chronique, les mettant à risque de cirrhose, l'insuffisance hépatique ou carcinome hépatocellulaire. Action directe des agents antiviraux ciblant la réplication du VHC et de la maturation représentent premiers agents anti-VHC, comme l'a récemment démontré par l'approbation réglementaire de deux inhibiteurs de la protéase NS3 extrémité N-terminale (bocéprévir et téla.......

This work was funded by both the Canadian Institutes of Health Research and Natural Sciences and the Engineering Research Council of Canada. M. Bisaillon is a Chercheur Boursier Senior from the Fonds de Recherche en Santé du Québec and also a member of the Centre de Recherche Clinique du Centre Hospitalier Universitaire de Sherbrooke. We thank Dr. Ralf Bartenschlager for the generous gift of the HCV replicon system. We also thank Dr. Charles Rice and Dr. Daniel Lamarre for kindly providing the hepatic cell line. We also want to thank Guillaume Tremblay for technical assistance.