Imunofluorescência para monitorar a Incorporação celular de lactoferrina humana e sua Associated atividade antiviral contra o vírus da hepatite C

The human lactoferrin (hLF) is a component of the immune system. In this study, immunofluorescence assays are used to demonstrate both the hepatocellular uptake of hLF and a qualitative reduction in the hepatitis C virus replication upon treatment with hLF.

Imunofluorescência é uma técnica de laboratório vulgarmente usados ​​para estudar vários aspectos da biologia. É tipicamente usado para visualizar a distribuição e / ou a localização de uma molécula alvo em células e tecidos. Imunofluorescência baseia-se na especificidade de anticorpos fluorescentes marcado contra os seus antigénios correspondentes no interior de uma célula. Ambas abordagens directas e indirectas de imunofluorescência pode ser usado que se baseiam no uso de anticorpos ligados a um fluorocromo. A imunofluorescência direta é menos freqüentemente usado porque fornece sinal inferior, envolve custos mais elevados e menos flexibilidade. Em contraste, imunofluorescência indireta é mais comumente utilizado devido à sua alta sensibilidade e fornece um sinal amplificado desde mais de um anticorpo secundário pode anexar a cada anticorpo primário. Neste texto, tanto microscopia de epifluorescência e microscopia confocal foi utilizada para monitorizar a internalização da lactoferrina humana, um componente importante da resposta imunesistema, em células hepáticas. Além disso, nós monitorizado o potencial inibitório da hLF na replicação intracelular do vírus da hepatite C por meio de imunofluorescência. Ambas as vantagens e desvantagens associadas a estes métodos são discutidos.

Immunofluorescence is a technique that uses a fluorescence microscope to visualize the distribution and/or localization of a target molecule in a biological sample. Immunofluorescence relies on the specificity of fluorescent-labelled antibodies against their corresponding antigens within a cell¹. It is typically used on tissue sections and cultured cell lines in order to analyze the distribution/localization of various biological molecules such as proteins, nucleic acids and glycans. It should be noted that immunofluorescence is often used in combination with other non-antibody methods of fluorescent staining such as the 4',6-diamidino-2-phenylindole (DAPI)....

1. Células e Preparação de tratamento

1. Numa placa de 24 poços, colocar uma tampa de vidro no fundo dos poços. Lavar cada poço com tampão fosfato salino (PBS).
2. Semente células Huh-7 que suportam o replicão de VHC subgen�ico em cada poço a uma densidade de 5 x 10 ⁴ células / poço. Se não houver tratamento a fazer, as células podem ser semeadas a uma densidade mais elevada. O meio de cultura é de Dulbecco Modified Eagle Médium (DMEM) suplementado com 10% de Soro Fetal Bov.......

A capacidade do Huh-7 linha celular hepática para internalizar exogenamente administrada hLF foi monitorizada utilizando imunofluorescência em um miscroscope confocal. hLF foi adicionado ao meio de cultura e a internalização foi deixada por 24 horas, após o que, a hLF extracelular foi lavada com PBS e a membrana ligada a hLF residual foi degradada com um tratamento com tripsina 5 min (1 mL). As células foram re-semeadas e deixou-se voltar a aderir durante 18 h antes de coloração por imunofluorescência. A fim de.......

A epidemia de HCV permanece uma ameaça global, com 80% dos pacientes recém-infectadas desenvolvem uma infecção crônica, colocando-os em risco de cirrose, insuficiência hepática ou carcinoma hepatocelular. Por acção directa agentes antivirais combatem a replicação do HCV e maturação representam agentes anti-HCV de primeira linha, como recentemente demonstrado pela aprovação regulamentar de dois NS3 N-terminal inibidores da protease (boceprevir e telaprevir). A actividade anti-VHC hLF é actualmente acredit.......

This work was funded by both the Canadian Institutes of Health Research and Natural Sciences and the Engineering Research Council of Canada. M. Bisaillon is a Chercheur Boursier Senior from the Fonds de Recherche en Santé du Québec and also a member of the Centre de Recherche Clinique du Centre Hospitalier Universitaire de Sherbrooke. We thank Dr. Ralf Bartenschlager for the generous gift of the HCV replicon system. We also thank Dr. Charles Rice and Dr. Daniel Lamarre for kindly providing the hepatic cell line. We also want to thank Guillaume Tremblay for technical assistance.