Analyse af Udvikling Tooth Kim innervation Brug Mikrofluid Co-kultur Devices

Co-cultures represent a valuable method to study the interactions between nerves and target tissues and organs. Microfluidic systems allow co-culturing ganglia and whole developing organs or tissues in different culture media, thus representing a valuable tool for the in vitro study of the crosstalk between neurons and their targets.

Innervation spiller en central rolle i udviklingen, homeostase og regenerering af organer og væv. Imidlertid er mekanismerne bag disse fænomener ikke godt forstået endnu. Især er den rolle, innervation i tand udvikling og regeneration forsømt.

Adskillige in vivo-undersøgelser har givet vigtige oplysninger om de mønstre af innervation af dental væv under udviklings- og reparation processer i forskellige dyremodeller. Men de fleste af disse fremgangsmåder ikke er optimale til at fremhæve den molekylære basis for interaktionerne mellem nervefibre og målorganer og væv.

Co-kulturer udgør en værdifuld metode til at undersøge og manipulere samspillet mellem nervefibre og tænder på en kontrolleret og isoleret miljø. I de sidste årtier har konventionelle co-kulturer under anvendelse af samme dyrkningsmedium udført i meget korte perioder (f.eks, to dage)at undersøge de attraktive eller frastødende effekter af at udvikle mundtlige og dental væv på sensoriske nervefibre. Imidlertid er udvidelse af kulturen periode, der kræves for at undersøge virkningerne af innervation på tanden morfogenese og cytodifferentiation.

Mikrofluidiksystemer tillader co-kulturer af neuroner og forskellige celletyper i deres passende kulturmedier. Vi har for nylig påvist, at trigeminale ganglier (TG) og tænder er i stand til at overleve i en lang periode, hvor co-dyrket i mikrofluide anordninger, og at de opretholder i disse betingelser samme innervation mønster, at de viser in vivo.

På dette grundlag beskriver vi, hvordan at isolere og co-kultur udvikler trigeminusganglier og tand bakterier i en mikrofluid co-kultur system.This protokol beskriver en enkel og fleksibel måde at co-kultur ganglier / nerver og målvæv og studere roller specifikke molekyler på sådanne interaktioner i et controlled og isoleret miljø.

Innervation spiller en central rolle i udviklingen, homeostase og regenerering af organer og væv ^1,2. Endvidere er innervation involveret i reguleringen af stamcelleproliferation, mobilisering og differentiering ^3-5. Faktisk har de seneste undersøgelser realiseret i væv af orofacial kompleks vist, at parasympatiske nerver er nødvendige for epitelial stamceller funktion under udvikling og revitalisering af spytkirtlerne ^6,7. Ligeledes er det blevet vist, at innervation er nødvendigt for udviklingen og vedligeholdelsen af smagsløgene ^8-11. Det er således vigtigt at analysere de endnu forsømte roller innervation i udviklingen ....

Alle mus blev opretholdt og håndteres i henhold til den schweiziske dyrevelfærd Law og i overensstemmelse med reglerne i Cantonal Veterinary kontoret, Zürich.

1. Udarbejdelse af Dissektion Materiel, Kultur Media, mikrofluidenheder

1. Autoklave mikro-dissektion pincet og sakse (121 ° C, sterilisering tid: 20 min) og gemme dem i en steril beholder.
2. Sterilisere dækglas (24 mm x 24 mm) ved at inkubere dem i 1 M HCI i 24 timer på en orbital ryster ved 37 ° C. Vaske dem tr.......

Disse resultater viser, at isolerede trigeminusganglier kan vokse i et rum af mikrovæskeanordning og desuden, at udviklingen af ​​de isolerede tand bakterier opretholdes i en lang periode i det andet rum af mikrofluidapparatet. Forskellige kulturmedier anvendes i de to rum, og mikrorillerne mellem de to rum tillader udvidelse af axon fra trigeminus ganglion over for udviklingslandene tand bakterier. Figur 3 repræsenterer en visualisering af neurofilament via immunfluorescens ^37, i en co.......

Forrige in vitro studier af tand innervation var baseret på konventionelle co-kulturer af trigeminusganglier og dental væv eller celler ^26,28,29. Disse undersøgelser blev udført for at undersøge hovedsagelig de attraktive virkninger af disse celler eller væv på sensoriske axoner ^38. Selvom bringe betydelige fremskridt på området, blev en række tekniske spørgsmål rejst. Tooth bakterier begynder at degenerere efter få dages kultur ^37. Baseret på disse observationer, .......

The work was funded by the University of Zurich. The authors would like to thank Estrela Neto and Dr. Meriem Lamghari for helping in establishing the co-culture conditions.