Analys av Utveckling Tooth Germ Innervation Använda mikroflödes Co-kultur-enheter

Co-cultures represent a valuable method to study the interactions between nerves and target tissues and organs. Microfluidic systems allow co-culturing ganglia and whole developing organs or tissues in different culture media, thus representing a valuable tool for the in vitro study of the crosstalk between neurons and their targets.

Innervation spelar en nyckelroll i utvecklingen, homeostas och förnyelse av organ och vävnader. Emellertid är de mekanismer som ligger bakom dessa fenomen inte förstått än. Framför allt försummas roll innervation i tand utveckling och förnyelse.

Flera in vivo-studier har gett viktig information om mönster innervation av tandvävnad under utveckling och reparationsprocesser i olika djurmodeller. Men de flesta av dessa tillvägagångssätt är inte optimala för att belysa den molekylära grunden för växelverkan mellan nervfibrer och målorgan och vävnader.

Samodlingar utgör en värdefull metod för att undersöka och manipulera interaktioner mellan nervfibrer och tänder i en kontrollerad och isolerad miljö. Under de senaste årtiondena har konventionella samkulturer med samma odlingsmedium utförts under mycket korta perioder (t.ex., två dagar)att undersöka de attraktiva eller motbjudande effekterna av att utveckla orala och dentala vävnader på sensoriska nervfibrer. Dock är en förlängning av odlingsperioden som krävs för att undersöka effekterna av innervation på tand morfogenes och cytodifferentiation.

Mikrofluidik system kan co-kulturer av nervceller och olika celltyper i sitt lämpligt odlingsmedia. Vi har nyligen visat att trigeminala ganglierna (TG) och tänderna kan överleva under en lång tidsperiod när samodlade i mikrofluidikanordningar, och att de upprätthåller under dessa förhållanden samma innervation mönster som de visar in vivo.

På grundval av detta beskriver vi hur man isolera och co-kultur utvecklar trigeminala ganglier och tand bakterier i en mikroflödessystem co-kultur system.Detta protokoll beskriver ett enkelt och flexibelt sätt att samarbeta kultur ganglierna / nerver och målvävnader och att studera rollerna specifika molekyler på sådana interaktioner i en controlled och isolerad miljö.

Innervation spelar en nyckelroll i utvecklingen, homeostas och förnyelse av organ och vävnader ^1,2. Dessutom är innervationen involverat i regleringen av stamcellsproliferering, mobilisering och differentiering ^{3 - 5.} I själva verket har nya studier genomförda i vävnader i orofacial komplex visat att parasympatiska nerver är nödvändiga för epitel progenitorceller funktion under utveckling och förnyelse av spottkörtlarna ^6,7. På samma sätt har det visat sig att innervation är nödvändigt för utveckling och underhåll av smaklökar ^8-11. Därför är det viktigt att analysera ännu försummade roller innervation i utvecklingen av and....

Alla möss bibehölls och hanteras enligt den schweiziska djurskyddslagen och i enlighet med bestämmelserna i kontoret Cantonal veterinär, Zürich.

1. Framställning av Dissection Material, Kultur Media, mikroflödessystem enheter

1. Autoklav mikro-dissektion pincett och sax (121 ° C, sterilisering tid: 20 min) och lagra dem i en steril behållare.
2. Sterilisera glas täckglas (24 mm x 24 mm) genom att inkubera dem i en 1 M HCl under 24 timmar på en orbital skakanordning .......

Dessa resultat visar att isolerade trigeminala ganglier kan växa i en avdelning av mikroflödessystem enheten och dessutom att utvecklingen av de isolerade tand bakterier upprätthålls under en lång tid i den andra avdelningen av mikroflödessystem enhet. Olika odlingsmedier används i de båda avdelningarna, och mikrospåren mellan de två avdelningarna medger förlängning av Axon från trigeminala ganglion mot utvecklingstand bakterier. Figur 3 representerar en visualisering av neurofilament via i.......

Tidigare in vitro studier av tand innervation baserades på konventionella samkulturer av trigeminala ganglier och dentala vävnader eller celler ^26,28,29. Dessa studier genomfördes för att undersöka huvudsakligen de attraktiva effekterna av dessa celler eller vävnader på sensoriska axoner ^38. Även föra betydande framsteg inom området, har flera tekniska frågor upp. Tand bakterier börjar urarta efter några dagars odling ^37. Baserat på dessa observationer, växande ne.......

The work was funded by the University of Zurich. The authors would like to thank Estrela Neto and Dr. Meriem Lamghari for helping in establishing the co-culture conditions.