Abstract
Bioengineering
Optische super-resolutie beeldvorming met gestructureerde verlichting microscopie (SIM) is een belangrijke technologie voor de visualisatie van processen op moleculair niveau in de chemische en biomedische wetenschappen. Hoewel commerciële SIM systemen zijn systemen die op maat zijn ontworpen in het laboratorium commerciële systemen beter presteren dan deze eigenlijk ontworpen voor gebruiksgemak en algemene toepassingen, zowel qua beeldvorming betrouwbaarheid en snelheid. Dit artikel geeft een uitgebreide gids voor het opbouwen van een SIM dat gebruik maakt totale interne reflectie (TIR) verlichting en kan imaging up to 10 Hz in drie kleuren met een resolutie van 100 nm. Door de combinatie van SIM en TIRF, het systeem beter beeldcontrast dan concurrerende technologieën. Om deze specificaties te bereiken worden verschillende optische elementen die gebruikt worden om automatische controle over de polarisatietoestand en de ruimtelijke structuur van de verlichting licht mogelijk te maken voor alle beschikbare excitatie wavelengths. Volledige details over de hardware-implementatie en controle worden gegeven aan synchronisatie tussen excitatielicht patroon generatie, golflengte, polarisatie staat, en de camera controle te bereiken met de nadruk op het bereiken van maximale overname frame rate. Een stap-voor-stap protocol voor het systeem uitlijnen en kalibratie wordt gepresenteerd en de haalbare verbetering resolutie gevalideerd op ideale testmonsters. De mogelijkheid om video-rate super-resolutie beeldvorming wordt gedemonstreerd met levende cellen.
ABOUT JoVE
Copyright © 2024 MyJoVE Corporation. All rights reserved