Un guide pour structuré Illumination FRBR Microscopie à haute vitesse avec plusieurs couleurs

Optique imagerie super-résolution en microscopie d'éclairage structuré (SIM) est une technologie clé pour la visualisation des processus au niveau moléculaire dans le domaine des sciences biomédicales et chimiques. Bien que les systèmes SIM commerciaux sont disponibles, les systèmes qui sont conçus sur mesure dans le laboratoire peut surpasser les systèmes commerciaux, ce dernier généralement conçus pour une facilité d'utilisation et les applications générales, tant en termes d'imagerie fidélité et de la vitesse. Cet article présente un guide en profondeur à la construction d'un système qui utilise la carte SIM totale illumination réflexion interne (TIR) ​​et est capable de l'imagerie jusqu'à 10 Hz en trois couleurs à une résolution atteignant 100 nm. En raison de la combinaison de la carte SIM et la FRBR, le système offre un meilleur contraste de l'image que les technologies rivales. Pour atteindre ces spécifications, plusieurs éléments optiques sont utilisés pour permettre le contrôle automatisé sur la structure de l'état de polarisation et spatiale de la lumière d'éclairage pour toute excitation wav disponibleelengths. Tous les détails sur la mise en œuvre et le contrôle du matériel sont donnés pour réaliser la synchronisation entre la production de lumière d'excitation de motif, longueur d'onde, l'état de polarisation, et le contrôle de la caméra en mettant l'accent sur la réalisation de taux de trame maximale d'acquisition. Un protocole étape par étape pour l'alignement et l'étalonnage du système est présenté et l'amélioration de la résolution obtenue est validée sur des échantillons d'essai idéal. La capacité pour la vidéo à taux super-résolution imagerie est démontrée avec des cellules vivantes.