Coculture Analyser å studere macrophage og Microglia Stimulering av Glioblastoma Invasion

Glioblastoma multiforme (grad IV gliomer) er en svært aggressiv kreft hos mennesker med en median overlevelse på ett år etter diagnose. Til tross for økt forståelse for de molekylære hendelser som gir opphav til glioblastomas, fortsatt denne kreftformen svært motstandsdyktig for konvensjonell behandling. Kirurgisk reseksjon av hjernesvulster høy klasse er sjelden fullstendig på grunn av den svært infiltrerende natur glioblastom celler. Terapeutiske tilnærminger som demper glioblastom celle invasjon er derfor et attraktivt alternativ. Vårt laboratorium og andre har vist at tumor assosiert makrofager og microglia (bosatt hjernemakrofager) sterkt stimulere glioblastom invasjon. Protokollen som er beskrevet i dette dokumentet brukes til å modellere glioblastom-makrofag / mikroglia interaksjon ved hjelp av in vitro kulturanalyser. Denne tilnærmingen kan i stor grad legge til rette for utvikling og / eller funn av narkotika som forstyrrer kommunikasjonen med makrofagene som gjør at dette ondartet Behavior. Vi har etablert to robuste coculture invasjon analyser hvor microglia / makrofager stimulerer glioma celle invasjon av 5-10 ganger. Glioblastom celler merket med et fluoriserende fargestoff eller som konstitutivt uttrykker et fluorescent protein er belagt uten og med makrofager / mikroglia på matrise-belagt polykarbonat kammerinnsatser eller innleiret i en tredimensjonal matrise. Celle invasjon bestemmes ved hjelp av fluorescens mikroskopi av bildet og telle bare invaderende celler på undersiden av filteret. Ved hjelp av disse analysene, flere farmakologiske hemmere (JNJ-28312141, PLX3397, Gefitinib, og Semapimod), har blitt identifisert som blokkerer makrofag / microglia stimulert glioblastom invasjon.