Cocultivo Los ensayos para Estudiar macrófagos y microglia Estimulación de Glioblastoma Invasion

El glioblastoma multiforme (grado IV glioma) es un cáncer muy agresivo humana con una supervivencia media de diagnóstico posterior a 1 año. A pesar de la mayor comprensión de los eventos moleculares que dan lugar a glioblastomas, este cáncer sigue siendo altamente refractaria al tratamiento convencional. La resección quirúrgica de los tumores cerebrales de alto grado es rara vez completa debido a la naturaleza altamente infiltrante de células de glioblastoma. Los enfoques terapéuticos que atenúan la invasión de células de glioblastoma, por tanto, es una opción atractiva. Nuestro laboratorio y otros han demostrado que los macrófagos y microglia tumor (macrófagos cerebrales residentes) estimular fuertemente invasión glioblastoma asociados. El protocolo descrito en este documento se utiliza para modelar la interacción glioblastoma y macrófagos / microglia utilizando ensayos de cultivo in vitro. Este enfoque puede facilitar en gran medida el desarrollo y / o el descubrimiento de fármacos que interrumpen la comunicación con los macrófagos que permite a este Behav malignoior. Hemos establecido dos ensayos de co-cultivo de invasión robustas donde microglía / macrófagos estimulan la invasión de células de glioma de 5 - 10 veces. células de glioblastoma marcados con un marcador fluorescente o expresar constitutivamente una proteína fluorescente se cultivan en placas con y sin los macrófagos / microglia en insertos de cámara de policarbonato de matriz recubierto o embebidas en una matriz tridimensional. la invasión de células se evaluó mediante el uso de microscopía de fluorescencia a la imagen y contar células sólo invasivos en la parte inferior del filtro. Usando estos ensayos, varios inhibidores farmacológicos (JNJ-28312141, PLX3397, Gefitinib, y Semapimod), se han identificado que bloquean los macrófagos / microglia estimulados invasión glioblastoma.