Summary
Abstract
Introduction
Protocol
Representative Results
Discussion
Acknowledgements
Materials
References
Biology
Problems in the processing of biological samples for scanning electron microscopy observation include cell collapse, treatment of samples from wet microenvironments and cell destruction. Low-cost and relatively rapid protocols suited for preparing challenging samples such as floral meristems, oomycete cysts, and fungi (Agaricales) are compiled and detailed here.
وتشمل المشاكل المشتركة في تجهيز العينات البيولوجية لالملاحظات مع المجهر الإلكتروني الماسح (SEM) انهيار الخلية، ومعالجة عينات من microenvironments الرطب وتدمير الخلايا. باستخدام الأنسجة الشباب الأزهار، الخراجات طلائعيات بيضية، وجراثيم الفطريات (غاريقونيات) كأمثلة، بروتوكولات محددة لمعالجة عينات الحساسة موصوفة هنا أن التغلب على بعض التحديات الرئيسية في معالجة عينة لالتقاط الصور تحت SEM.
الخلايا الإنشائية نباتية ثابتة مع القوات المسلحة الأنغولية (-الفورمالين الخل من الكحول) ومعالجتها مع نقطة مجفف الحرجة (CPD) لم يظهر انهارت الجدران الخلوية أو أجهزة مشوهة. هذه النتائج هي حاسمة لإعادة إعمار تنمية الأزهار. إجراءات مماثلة على أساس وثيقة البرنامج القطري لعينات من microenvironments الرطبة، مثل الخراجات طلائعيات بيضية الثابتة غلوتارالدهيد، هو الأمثل لاختبار النمو المتفاوت للخصائص التشخيصية (على سبيل المثال، العمود الفقري الكيس) على أنواع مختلفة من سوbstrates. وتجنب تدمير خلايا ممرضة تعلق على جراثيم الفطريات بعد الإماهة، والجفاف، ومعاملة CPD، خطوة مهمة لمزيد من الدراسات الفنية لهذه الخلايا.
البروتوكولات بالتفصيل هنا تمثل منخفضة التكلفة وبدائل سريعة لاقتناء صور ذات نوعية جيدة لإعادة بناء عمليات النمو ودراسة الخصائص التشخيصية.
في علم الأحياء، وقد تم تمديد استخدام المجهر الإلكتروني الماسح (SEM) للدراسات التطور الهيكلي، مورفولوجيا المقارن، تطوير الجهاز، وتوصيف السكان أو الأنواع 1. مع عرض ثنائي الأبعاد للهياكل مجهرية، مجالات مثل micromorphology والنظاميات استفادت من التقدم تقنية ووزارة شؤون المرأة منذ النصف الثاني من القرن التاسع 20. على سبيل المثال، فإن إدخال منهجية تفل طلاء في 1970s الملاحظات الممكنة من المواد الحساسة مثل قمم تبادل لاطلاق النار والزهور تعزيز التصوير من الأنسجة غير موصل 2 و 3. يستخدم SEM الالكترونات طرد من سطح العينة لإنتاج التضاريس في بيئة عا....
ملاحظة: يتضمن هذا البروتوكول ستة أقسام رئيسية، ثلاثة المكرسة للكائنات محددة (الأقسام 1-3)، وثلاث واصفا إجراءات مشتركة بين جميع (4-6). النجمة (*) تشير إلى الخطوات تعديلها من قبل المجربون.
1. دراسات الدول النامية وتشكلت بالكامل هياكل النب.......
وفيما يتعلق البروتوكولات ووزارة شؤون المرأة القياسية، والإجراءات المعروضة هنا تشمل سريعة نسبيا، وسهلة لمتابعة، ومنهجيات منخفضة التكلفة. اعتمادا على كمية من العينات وعلى سهولة المعالجة، فإنه يأخذ 4-5 أيام للحصول على صور ذات جودة جيدة. بما في ذلك احتياطات السلامة الك?.......
وقد لقي هذا المشروع بتمويل من البحث والابتكار برنامج الاتحاد الأوروبي أفق 2020 بموجب اتفاقية منحة رقم 634429. ويعكس هذا المنشور وجهات النظر فقط للمؤلف، والمفوضية الأوروبية لا يمكن أن يكون مسؤولا عن أي استخدام التي يمكن أن تكون مصنوعة من المعلومات الواردة فيه. ونحن نعترف أيضا المساهمة المالية التي قدمها ريال حديقة النباتية، CSIC. ريال عن امتنانه للاتحاد الأوروبي [إيتن-SAPRO-238550] لدعم أبحاثها في الرمية. نحن نريد أيضا أن أشكر فرانسيسكو كالونج لليرجى تقديم الصور herculanea Phellorinia وباء. بيويو لتجهيز العينات (الشكل 5). وقد تم نقل كل الصور من قبل الخدمة ووزارة شؤون المرأة في ريال حديقة النباتية، CSIC في مدريد....
Name | Company | Catalog Number | Comments |
Acetic acid | No specific supplier | Skin irritation, eye irritation | |
aluminium stubs | Ted Pella, Inc. | 16221 | www.tedpella.com |
Centrifuge tubes | No specific supplier | ||
Critical Point Dryer | Polaron Quatum Technologies | CPD7501 | |
D (+) Glucose | Merck | 1,083,421,000 | |
Double sided sellotape | No specific supplier | ||
Ethanol absolute | No specific supplier. | Flammable | |
European bacteriological agar | Conda | 1800.00 | www.condalab.com |
Filter paper | No specific supplier | ||
Forceps | No specific supplier | ||
Formalin 4% | No specific supplier. | Harmful, acute toxicity, skin sensitisation, carcinogenicity. Flammable | |
Glass cover slips | No specific supplier | ||
Glass hermetic container | No specific supplier | ||
Glutaraldehyde 25% DC 253857.1611 (L) | Dismadel S.L. | 3336 | www.dismadel.com |
Mycological peptone | Conda | 1922.00 | www.condalab.com |
needles | No specific supplier | ||
Petri dishes | No specific supplier | ||
Plastic containers | No specific supplier | ||
Sample holder with lid for the critical point dryer | Ted Pella, Inc. | 4591 | www.tedpella.com |
scalpels | No specific supplier | ||
Scanning Electron Microscope | Hitachi | S3000N | |
Software for SEM | |||
Solution A: NaH2PO4 | |||
Solution B: Na2HPO4 | |||
Specimen holders | No specific supplier | ||
Sputter coater | Balzers | SCD 004 | |
Stereomicroscope | No specific supplier | ||
Transmission Electron Microscope (TEM) grids | Electron Microscopy Sciences | G200 (Square Mesh) | www.emsdiassum.com |
Tweezers | No specific supplier |
Tags
ABOUT JoVE
Copyright © 2024 MyJoVE Corporation. All rights reserved