מיקרוסקופ אלקטרוני סורק הפרוטוקולים (SEM) עבור בעייתי הצמח, Oomycete, וכן דוגמאות פטרייתיים

Problems in the processing of biological samples for scanning electron microscopy observation include cell collapse, treatment of samples from wet microenvironments and cell destruction. Low-cost and relatively rapid protocols suited for preparing challenging samples such as floral meristems, oomycete cysts, and fungi (Agaricales) are compiled and detailed here.

בעיות נפוצות בעיבוד של דגימות ביולוגיות לתצפיות עם מיקרוסקופ אלקטרונים סורק (SEM) כוללים קריסת התא, טיפול של דגימות microenvironments רטוב והרס התא. באמצעות רקמות פרחים צעירות, ציסטות oomycete, נבגי פטריות (Agaricales) כדוגמות, פרוטוקולים ספציפיים לעבד דגימות עדינות מתוארות כאן כי להתגבר על כמה מן האתגרים העיקריים טיפול מדגם עבור לכידת תמונה תחת SEM.

meristems הפרחוני קבוע עם ה- FAA (פורמלין-אצטית-אלכוהול) ומעובד עם שיער הנקודה הקריטי (CPD) לא גילה קרס קירות הסלולר או איברים מעוותים. תוצאות אלה הן קריטיות לבנייה מחדש של פיתוח פרחוני. טיפול דומה מבוסס CPD של דגימות microenvironments הרטוב, כגון ציסטות oomycete הקבועה glutaraldehyde, הוא אופטימלי כדי לבחון את גדילת ההפרש של מאפייני אבחון (למשל, קוצי ציסטה) על סוגים שונים של substrates. הרס של תא אחות מצורף נבגי פטריות נמנע לאחר התייבשות, התייבשות, ואת טיפול CPD, צעד חשוב עבור מחקרים תפקודיים נוסף של תאים אלה.

הפרוטוקולים המפורטים כאן מייצגים בעלות נמוכה וחלופות מהירות לרכישת תמונות באיכות טובה לשחזר תהליכי גדילה ללמוד את מאפייני אבחון.

בביולוגיה, השימוש במיקרוסקופ אלקטרונים סורק (SEM) הוארך ללימודי האבולוציה מבניים, מורפולוגיה השוואתי, פיתוח איברים, ואפיון של אוכלוסיות או מינים ^1. עם הנוף שלה דו ממדים של מבנים מיקרוסקופים, בתחומים כגון micromorphology ו סיסטמטיקה הרוויחו מן התקדמות טכניקת SEM מאז המחצית השנייה של המאה ^ה -20. לדוגמא, את ההקדמה של המתודולוגיה ציפוי גמגום בשנתי ה -1970 ערך מדידות אפשריות של חומרים עדינים כגון apices לירות ופרחי שיפור ההדמיה של שאינו מוליך רקמות ^{2, 3.} SEM משתמשת האלקטרונים הנפלטים מן השטח של הדגימה כדי לשחזר את הטופוגרפיה בסביבה גבוהה וא....

הערה: פרוטוקול זה כולל שישה חלקים עיקריים, שלושה מוקדשי אורגניזמים ספציפיים (סעיפים 1-3), ושלוש המתארים את ההליכים נפוצים לכל (4-6). כוכביות (*) מצביעות צעדים שונים על ידי הנסיינים.

1. מחקרים של פיתוח ומבני צמח מגובש

פיתוח פרחוני קיבוע של פיתוח ומבני צמח מגובש

באמצעות הפרוטוקול-CPD FAA המתואר כאן, רקמות צמח צעירות ובוגרות שתוקנו באופן המיטבי מיובש הדמית SEM. תהליכים כגון פיתוח פרחוני ניתן לשחזר בגלל הטופוגרפיה ?.......

עם כל כבוד פרוטוקולי SEM רגילים, את שיטות העבודה שהוצגו כאן כוללות יחסית מהירות, קל לעקוב, ומתודולוגיות בעלות נמוכה. בהתאם לכמות של דגימות על מנת להקל על עיבוד, זה לוקח ארבעה עד חמישה ימים כדי לרכוש תמונות באיכות טובה. כוללים אמצעי בטיחות נאות עבור מבצע CPD ו SEM, הנהלים הם ?.......

פרויקט זה קבל מימון מן המחקר של Horizon 2020 ותכנית חדשנות האיחוד האירופי תחת מס 'הסכם מענק 634429. פרסום זה משקף את הדעות רק של המחבר, והנציבות האירופיות לא יכולות להיות אחראיות על כל שימוש אשר עשוי להיות של המידע כלול בו. אנחנו גם מכירים את התרומה הכספית של Real Jardin Botanico, CSIC. SR הוא מודה האיחוד האירופי [ITN-Sapro-238,550] על התמיכה מחקרה ב Saprolegnia. כמו כן, אנו רוצים להודות פרנסיסקו Calonge עבור חביב לספק את התמונות Phellorinia herculanea ו- B. פואיו לעיבוד דגימות (איור 5). כל התמונות צולמו על ידי שירות SEM בבית Real Jardin Botanico-CSIC במדריד.