Summary
Abstract
Introduction
Protocol
Representative Results
Discussion
Acknowledgements
Materials
References
Biology
Problems in the processing of biological samples for scanning electron microscopy observation include cell collapse, treatment of samples from wet microenvironments and cell destruction. Low-cost and relatively rapid protocols suited for preparing challenging samples such as floral meristems, oomycete cysts, and fungi (Agaricales) are compiled and detailed here.
स्कैनिंग इलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोप (SEM) के साथ टिप्पणियों के लिए जैविक नमूने के प्रसंस्करण में आम समस्याओं सेल पतन, गीला microenvironments और सेल विनाश से नमूने के उपचार में शामिल हैं। नाजुक नमूने यहां बताए गए SEM के तहत छवि पर कब्जा के लिए नमूना उपचार में मुख्य चुनौतियों में से कुछ पर काबू पाने की प्रक्रिया करने के लिए युवा पुष्प ऊतकों, oomycete अल्सर, और कवक बीजाणुओं (Agaricales) उदाहरण के रूप में विशिष्ट प्रोटोकॉल का उपयोग करना,।
पुष्प मेरिस्टेमों एफएए के साथ तय (Formalin-एसिटिक-शराब) और महत्वपूर्ण बिंदु ड्रायर (सीपीडी) के साथ कार्रवाई की सेलुलर दीवारों या विकृत अंगों ढह प्रदर्शित नहीं किया था। इन परिणामों के पुष्प विकास के पुनर्निर्माण के लिए महत्वपूर्ण हैं। ऐसे glutaraldehyde तय oomycete अल्सर के रूप में गीला microenvironments, से नमूने का एक समान सीपीडी आधारित उपचार, सु के विभिन्न प्रकारों पर नैदानिक विशेषताओं का अंतर विकास (जैसे, पुटी कांटा) का परीक्षण करने के लिए इष्टतम हैbstrates। नर्स कवक बीजाणुओं से जुड़ी कोशिकाओं के विनाश पुनर्जलीकरण, निर्जलीकरण, और सीपीडी उपचार, इन कोशिकाओं के आगे कार्यात्मक अध्ययन के लिए एक महत्वपूर्ण कदम के बाद बचा हुआ था।
प्रोटोकॉल यहाँ विस्तृत कम लागत और अच्छी गुणवत्ता के चित्र के अधिग्रहण के विकास की प्रक्रिया को फिर से संगठित करने के लिए और नैदानिक विशेषताओं का अध्ययन करने के लिए तेजी के विकल्प का प्रतिनिधित्व करते हैं।
जीव विज्ञान में, स्कैनिंग इलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोपी का उपयोग करें (SEM) संरचनात्मक विकास, तुलनात्मक आकृति विज्ञान, अंग विकास, और आबादी या प्रजातियों 1 के लक्षण वर्णन के अध्ययन के लिए बढ़ा दिया गया है। सूक्ष्म संरचनाओं के अपने दो आयामी दृष्टिकोण के साथ, इस तरह के micromorphology और व्यवस्था जैसे क्षेत्रों 20 वीं सदी की दूसरी छमाही के बाद से SEM तकनीक अग्रिमों से फायदा। उदाहरण के लिए, 1970 के दशक में धूम कोटिंग पद्धति की शुरूआत गैर प्रवाहकीय ऊतकों 2, 3 की इमेजिंग बढ़ाने ऐसे शूट apices और फूल के रूप में नाजुक सामग्री के संभावित अवलोकन किया। SEM के एक उच्च निर्वात वातावरण
नोट: इस प्रोटोकॉल छह मुख्य वर्गों, विशेष जीवों (वर्गों 1-3), और तीन सब (4-6) के लिए आम प्रक्रियाओं का वर्णन करने के लिए तीन समर्पित भी शामिल है। तारों (*) प्रयोगकर्ताओं द्वारा संशोधित कदम से संकेत मिलता है।
मानक SEM प्रोटोकॉल के लिए सम्मान के साथ, यहाँ प्रस्तुत प्रक्रियाओं अपेक्षाकृत तेजी से पालन करने के लिए आसान है, और कम लागत के तरीके शामिल हैं। नमूने की राशि पर और प्रसंस्करण में आसानी पर निर्भर करता है, यह.......
इस परियोजना अनुदान समझौते सं 634429. इस प्रकाशन केवल लेखक के विचारों को प्रतिबिंबित करता है के तहत यूरोपीय संघ के क्षितिज 2020 अनुसंधान और नवाचार कार्यक्रम से धन प्राप्त हुआ है, और यूरोपीय आयोग जो जानकारी का बनाया जा सकता है किसी भी उपयोग के लिए जिम्मेदार नहीं ठहराया जा सकता उसमें निहित। हम यह भी असली Jardin Botanico, CSIC द्वारा की गई वित्तीय योगदान को स्वीकार करते हैं। एसआर Saprolegnia में उसे अनुसंधान के समर्थन के लिए यूरोपीय संघ [ITN-SAPRO-238550] करने के लिए आभारी है। हम भी फ्रांसिस्को Calonge धन्यवाद कृपया नमूने प्रोसेसिंग (चित्रा 5) के लिए Phellorinia herculanea छवियों और बी Pueyo प्रदान करना चाहते हैं। सभी छवियों मैड्रिड में रियल Jardin Bota....
Name | Company | Catalog Number | Comments |
Acetic acid | No specific supplier | Skin irritation, eye irritation | |
aluminium stubs | Ted Pella, Inc. | 16221 | www.tedpella.com |
Centrifuge tubes | No specific supplier | ||
Critical Point Dryer | Polaron Quatum Technologies | CPD7501 | |
D (+) Glucose | Merck | 1,083,421,000 | |
Double sided sellotape | No specific supplier | ||
Ethanol absolute | No specific supplier. | Flammable | |
European bacteriological agar | Conda | 1800.00 | www.condalab.com |
Filter paper | No specific supplier | ||
Forceps | No specific supplier | ||
Formalin 4% | No specific supplier. | Harmful, acute toxicity, skin sensitisation, carcinogenicity. Flammable | |
Glass cover slips | No specific supplier | ||
Glass hermetic container | No specific supplier | ||
Glutaraldehyde 25% DC 253857.1611 (L) | Dismadel S.L. | 3336 | www.dismadel.com |
Mycological peptone | Conda | 1922.00 | www.condalab.com |
needles | No specific supplier | ||
Petri dishes | No specific supplier | ||
Plastic containers | No specific supplier | ||
Sample holder with lid for the critical point dryer | Ted Pella, Inc. | 4591 | www.tedpella.com |
scalpels | No specific supplier | ||
Scanning Electron Microscope | Hitachi | S3000N | |
Software for SEM | |||
Solution A: NaH2PO4 | |||
Solution B: Na2HPO4 | |||
Specimen holders | No specific supplier | ||
Sputter coater | Balzers | SCD 004 | |
Stereomicroscope | No specific supplier | ||
Transmission Electron Microscope (TEM) grids | Electron Microscopy Sciences | G200 (Square Mesh) | www.emsdiassum.com |
Tweezers | No specific supplier |
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