Сканирующей электронной микроскопии (SEM) Протоколы для Проблемной завода, оомицет и грибковые Образцы

Problems in the processing of biological samples for scanning electron microscopy observation include cell collapse, treatment of samples from wet microenvironments and cell destruction. Low-cost and relatively rapid protocols suited for preparing challenging samples such as floral meristems, oomycete cysts, and fungi (Agaricales) are compiled and detailed here.

Общие проблемы при обработке биологических образцов для наблюдений с помощью сканирующего электронного микроскопа (SEM), включают коллапс клеток, обработка образцов из влажных микросреды и разрушение клеток. Использование молодых цветочных тканей, оомицет цисты, и спор грибов (Agaricales) в качестве примеров, конкретные протоколы для обработки тонких образцов, описанных здесь, которые необходимо преодолеть некоторые из основных проблем в лечении образца для захвата изображения при SEM.

Цветочные меристемы, скрепленные FAA (формалин-уксусный-спирт) и обрабатывается с точкой сушильную Critical (CPD) не проявляла разрушилась клеточные стенки или искаженное органы. Эти результаты имеют решающее значение для реконструкции цветочного развития. Подобная CPD-основанная обработка образцов из влажных микросреды, таких как глутаральдегида фиксированные оомицет кист, является оптимальным для проверки дифференциального роста диагностических характеристик (например, киста) шипами на различных типах суbstrates. Уничтожение трофоцитов прикрепленных к спор грибов удалось избежать после регидратации, обезвоживания и лечения CPD, что является важным шагом для дальнейшего функциональных исследований этих клеток.

Подробно изложенные здесь протоколы представляют собой недорогие и быстрые альтернативы для приобретения качественных изображений, чтобы восстановить процессы роста и изучения диагностических характеристик.

В биологии, использование сканирующей электронной микроскопии (SEM) была распространена на изучение структурной эволюции, сравнительной морфологии, развития органов, а также характеристика популяций или видов ^1. Благодаря двухмерном виде микроскопических структур, таких областях, как микроморфологией и систематики прибыль от SEM техники достижений , начиная со второй половины 20 - ^го века. Например, введение методики покрыти распылением в 1970 - е годы стало возможным наблюдения деликатных материалов , таких как стрелять верхушках и цветов путем более широкого томографию непроводящих тканей ^2,

Примечание: Этот протокол включает в себя шесть основных секций, три посвящены конкретным организмов (разделы 1-3), и три, описывающие процедуры, общие для всех (4-6). Звездочки (*) указывают на действия измененных экспериментаторами.

1. Исследования развивающихся стран и полн?.......

Цветочный Разработка и фиксирование Разработка и полностью сформированными растений Структуры

Использование протокола FAA-CPD, описанный здесь, молодые и зрелые ткани растений оптимально фиксируется и обезвоживается для работы с изобр.......

Что касается стандартных протоколов SEM, процедуры, представленные здесь, включают в себя относительно быстро, легко следовать, и методологии недорогих. В зависимости от количества образцов и легкость обработки, это занимает от четырех до пяти дней, чтобы получить хорошее качество изоб?.......

Этот проект получил финансирование от научно-исследовательской и инновационной программы Европейского Союза Горизонт-2020 в рамках гранта соглашения № 634429. Данная публикация отражает только точку зрения автора, и Европейская комиссия не может нести ответственность за любое использование, которое может быть изготовлен из информации содержащиеся в нем. Мы также признаем, финансовый вклад, внесенный Real Ботанические, CSIC. SR благодарит Европейский Союз [ОИС-Sapro-238550] для поддержки своих исследований в Saprolegnia. Мы также хотим поблагодарить Francisco Calonge за любезно предоставить herculanea изображения Phellorinia и B. Pueyo для о....